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Virologica Sinica, 32 (6) : 537, 2017
Letter
一种用于鉴定病毒蛋白小泛素化修饰位点的新方法
1.中国科学院武汉病毒研究所,新发传染病中心,中国科学院高致病性病原生物学与生物安全实验室
2.武汉生物技术研究院
 Correspondence: zhengzh@wh.iov.cn
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摘要
小泛素化修饰(SUMOylation)作为一种重要的翻译后修饰过程,是由宿主的一系列酶参与的对细胞内蛋白的共价修饰,对细胞生理过程和病毒感染过程都起着重要的调节过程。鉴定病毒蛋白的SUMO化的修饰位点对于病毒与宿主相互关系研究和抗病毒药物的开发有重大意义。然而,有些SUMO化修饰位点不符合已报道的保守基序,利用传统的定点突变即使耗费大量精力也很难找到修饰位点。近年来,质谱检测技术为一种强大的工具,极大的深化了我们对蛋白质翻译后修饰的认知。然而,在SUMO化位点鉴定方面,由于SUMO化修饰的肽段经过酶解后太长,对于结果的解读成为难点。另一方面,由于SUMO化修饰的病毒蛋白在细胞内含量比较低并且是动态变化的,因此捕获足够量的被修饰病毒蛋白对成功检测非常重要。已报道目标蛋白能在大肠杆菌的SUMO化修饰系统(含有SUMO化修饰所需的各种酶)中修饰并且通过蛋白纯化能快速、大量的得到被修饰的目标蛋白。我们通过将该系统中的SUMO-1蛋白的95位氨基酸由苏氨酸突变成精氨酸,克服了质谱检测过程中修饰蛋白酶解后肽段太长的缺点。并以已知SUMO修饰位点的肠道病毒71型的3D聚合酶作为研究对象,用改进的大肠杆菌修饰系统联合质谱检测,不仅发现了已报道的3D蛋白的159位的赖氨酸,而且还发现了24位的赖氨酸也存在修饰。因此,本实验中的方法能快速、高效的检测到病毒的SUMO化修饰位点,是对现有的检测方法做新改进和提升。
Received: 31 Aug 2017  Accepted: 31 Aug 2017  Published online: 31 Aug 2017
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