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1990年05卷4期

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Review

速成单层法半微量病毒空斑技术的研究

孟继鸿, 朱圣禾, 孙永良

1990, 5(4): 341

本文报道一种不需预先制备细胞单层的速成单层法半微量病毒空斑技术(简称速成法)及其在空斑中和试验与空斑纯化试验中的应用。作者以脊髓灰质炎病毒为代表,对速成法的实验条件、可靠性、敏感性、重复性等作了系统研究,并以此法对单纯疱疹病毒、呼吸道合胞病毒和水泡性口炎病毒进行了空斑滴定。结果提示速成法简单快速、经济方便、敏感稳定、可靠易行,可能具有较大的实用和推广价值。

人集落刺激因子-1(CSF-1)对常见呼吸道病毒的抑制作用

姚堃, 周瑶玺, 吴筱玲, 周锋, 朱德煦, 陶旭

1990, 5(4): 347

本文观察集落刺激因子-1(CSF-1)及其诱生剂:内毒素(LPS)、胞壁二肽(MDP)和干扰素(IFN-α)对下列病毒所致细胞病变的抑制,包括不同型别腺病毒5株,单疱病毒Ⅰ型和Ⅱ型,流感病毒A_3型,鼻病毒,ECHO11型各1株,在人胚肺传代细胞株上病变抑制的结果如下:对HSV-1、HSV-2、腺病毒6、11、22型,流感A_3型,鼻病毒。(CSF-1)和IFN-α,一样有明显抑毒效果,LPS+MDP联合使用对以上病毒有明显增强抑毒作用。CSF-1和IFN-α的抑毒作用能分别被CSF-1和IFN-α的抗体所解除。 CSF-1在人胚肺传代细胞和人胚皮肤肌肉传代细胞上对VSV的抑毒效果在人胚肺细胞中效果比人胚皮肤肌肉细胞更明显。LPS10ng/ml作用48小时比作用24小时效果更强。LPS+MDP和IFN-α对二种细胞都有同样高效的抑毒作用。

肝内HDAg阳性慢性肝炎病理特点探讨

张永东, 张永源

1990, 5(4): 352

用直接酶标和直接免疫荧光法在120例HBsAg阳性肝组织中检测HDAg,发现5例阳性(4.2%),其中3例活动性肝硬化,2例慢性中型活动性肝炎。另设立相对应的单纯乙型肝炎作为对照,通过光镜、电镜、免疫组化的方法,重点探讨比较丁型肝炎与单纯乙型肝炎二者肝组织学的形态变化。丁型肝炎组肝细胞灶状坏死,桥接坏死,融合性坏死的程度比单纯乙型肝炎组重,丁型肝炎组较单纯乙型肝炎组常见的组织学改变是肝细胞呈灶状微小空泡的脂肪变性及灶状嗜酸性变性。HDAg阳性肝细胞呈疏松化、核固缩,其周围未见淋巴细胞浸润。

流行性出血热(EHF)病毒半微量甲基纤维素空斑法的建立

聂子林, 俞永新, 姚智慧

1990, 5(4): 357

本文报道EHF病毒一种新的空斑形成按术,即半微量甲基纤维素空斑法的建立及其应用。6株来源不同的毒株均可在V_(ero)-E_6细胞或V_(ero)细胞上形成清晰的空斑,形成的空斑能被特异抗EHF病毒血清所中和。其敏感性与用琼脂糖作覆盖物的空斑法一致。该法具有操作简便、快速等优点,适用于EHF的病原学和血清学研究。

ELISA法检测流行性腮腺炎病毒感染特异性IgM抗体的研究

傅崇权, 肖永久, 吴志强, 候干曾, 徐杏芳

1990, 5(4): 362

用流行性腮腺炎(流腮)病毒Enders株接种鸡胚尿囊腔培养,尿囊液经聚乙二醇6000处理制备流腮病毒抗原,用ELISA法检测流腮患者血清中特异性IgM抗体,其敏感性,特异性、重复性和稳定性都很高。 79份流腮患者血清,检出特异性IgM72份,阳性率为91%,32例非流腮患者IgM全部阴性、两者有极显著差异(P<0.01)。 10份血清作血清倍比稀释至1∶3200测IgM仍全部阳性,1∶6400稀释仅1例阴性,1∶12800稀释5例中仍有2例阳性。 10份血清作流腮抗原特异性抗体阻断试验,光密度抑制率均大于50%,平均为87%,10份标本作2-ME和SPA阻断后检测IgM抗体,结果2-ME阻断标本全部阴转,而SPA阻断标本仍阳性,证实所检测为流腮特异性抗体。 24份标本2次重复检测流腮IgM,其阴、阳性结果一致,这期间抗原放4℃ 1个月,提示抗原的稳定性和方法的重复性都很好。本方法敏感性明显高于血凝抑制试验,其阳性率分别为91%和61%,两者有显著差异。而且所用试剂简单经济,操作简便,快速,适用于临床早期诊断,易于广泛推广应用。

苦瓜提取物抗病毒作用及其有效成份的研究

黄天民, 许兆祥, 王燕平, 曲凤珍, 童玲莉

1990, 5(4): 367

本实验发现,小鼠皮下感染乙型脑炎病毒前腹腔注射苦瓜提取物(简称E.M.c.)有显著的保护作用,其保护率平均为66%;以E.M.c.静脉注射家兔后2小时,血清中的干扰素达高峰,其干扰素为I型干扰素;E.M.c.对小鼠NK细胞有明显的激活作用;经鉴定,E.M.c.中的有效成份主要是dsRNA,此外,还含有多糖类物质。

感染流行性出血热病毒家兔病毒血症的研究

彭红梅, 林雨霖, 高又新, 向近敏

1990, 5(4): 373

本文采用流行性出血热病毒114株实验感染家兔,用免疫荧光法及病毒培养技术研究了家兔病毒血症动态,发现感染后第6天,病毒抗原首先在淋巴细胞及单核细胞中出现;次日,亦可见于粒细胞中,第10—12天的抗原反应较强,第15天则明显减弱至消失。而在红细胞及血小板中始终未见明显的抗原反应。从感染后第3—13天的血浆中分离出病毒;感染后第6—15天,外周血单核细胞病毒分离阳性。结果表明,流行性出血热病毒在接种局部增殖后,侵入血液,并在白细胞中复制增殖,可能使病毒随血循环播散至全身其它组织脏器,造成因血传播引起的靶器官感染。

乙肝疫苗与小剂量干扰素、胸腺素联合应用对慢性乙肝抗病毒治疗效果的研究

赵文彬, 黄浦昌, 王行钵, 吴桃林, 周克捷, 张秀惠, 张元英, 林克泳

1990, 5(4): 379

本文用乙肝疫苗与小剂量干扰素等药物配伍治疗慢性乙肝及慢性病毒携带者。经一个疗程后,干扰素组、胎盘肽组和乙肝疫苗组HBsAg转阴率分别为13.7%,5.9%和0%;HBeAg转换率分别为68.8%,72.7%和20%。表明干扰素和免疫增强剂配伍对乙肝病毒复制有一定抑制作用,促使HBeAg转换,但对清除HBsAg无效。

云南基孔肯雅病毒生物学性状的研究

张海林, 米竹青, 施华芳, 自登云

1990, 5(4): 384

本文对分离自云南的基孔肯雅病毒进行了生物学特性研究。实验证明基孔肯雅病毒对乳鼠有强而稳定的致病性,对C6/36,BHK21及Vero细胞有致病变作用,能与鹅和鸽红细胞凝集,最适pH5.75。电镜观察病毒呈圆形,有膜,外径66.8nm,内径47.7nm。交互血凝抑制及中和试验表明,云南毒株之间或与国外原株在抗原性上无明显差别,为同一血清型,并与同亚组病毒反应较弱,与其它虫媒病毒无交叉。本文还讨论了云南株与国外原株在某些生物学特性方面的异同。

温度对茶尺蠖核型多角体病毒增殖动态的影响

叶恭银, 胡萃

1990, 5(4): 397

多角体计数、对流免疫电泳、单向免疫扩散及火箭免疫电泳测定的结果表明:26℃适于茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)的增殖。多角体含量或其相对值随着时间的推移而增长,并渐趋于平稳,两者间呈Logistic曲线关系。单位体重或单头幼虫所含的多角体数量(y_1或y_2)、扩散环直径(y_3)和火箭峰值(y_4)与时间(t)的关系式分别为:y_1=(8.1481)/(1+EXP(9.4210-0.0608t))×10~9PIB/克;y_2=(6.1596)/(1+EXP(5.4809-0.0376t))×10~8PIB/头,y_3=(1.4)/(1+EXP(2.710-0.015t))cm;y_4=(3.52)/(1+EXP(4.580-0.040t))cm。但30℃下,EoNPV增殖严重受抑制,饲毒后24~168小时内难以测出多角体,其后多角体含量也极显著低于26℃,乃至难以被三种免疫测定法测出。

1251标记病毒DNA探针制备方法的研究

谌济国, 吴远明

1990, 5(4): 404

本文报道以油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)DNA、单纯疤疹病毒(HSV)DNA、λDNA为材料,用国产~(125)I-碘化钠制备探针。探讨了离子强度,pH值、反应温度及时间诸因素对以三氯化铊为氧化剂核酸标记的影响。在pH值为4.8—4.9,离子强度(以Na~+计)为0.1mol/L、反应温度为70℃、时间为30分钟条件下,可获得高比活性的产物。~(125)I的掺入率在10—30%之间,探针的比活性可超过10~6cpm/μgDNA。点杂交结果显示,探针最低可检测出1Pg同源DNA,探针的特异性强,存放于-20%冰箱的探针在两个月内最低检测量没有明显变化。

几种化学药物对柑桔裂皮病类病毒感染和复制的影响

胡康洪, 周咏芝, 丁达明

1990, 5(4): 410

经柑桔裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,简称CEV)感染后的指示植物爪哇三七(Cynura aurantiaca),分别施用不同浓度的赤霉素(5ppm,10ppm,50ppm,100ppm,200ppm)、萘(100ppm,300ppm)、5-氟尿嘧啶(0.5mg/L,1mg/L,2mg/L)溶液,其相对感染指数(Relative infectivity index)均有程度不同的改变。抽提叶片核酸,经5%双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-银染色法结合凝胶扫描技术确定CEV浓度,辅以点杂交方法定性,观察到施用赤霉素组CEV浓度增高,施用萘组和5-氟尿嘧啶组CEV浓度均降低。用无性繁殖的柑桔苗作材料,CEV感染后分别施用50ppm赤霉素、300ppm萘、1mg/L 5-氟尿嘧啶溶液,用相同的分析方法,得到了与爪哇三七一致的结果。讨论了这三种药物影响CEV复制的意义。

不同处理方法对番茄和甜椒种子中TMV的脱毒效果

高维恒

1990, 5(4): 419

在70℃的温度下干热处理一天,或经过4年以上的干燥贮存,可以脱去番茄种子中所带的病毒(TMV),而用10%的Na_3PO_4溶液浸泡番茄种子30分钟,不能完全脱去种子中的TMV。可是,上述三种方法都不能有效地脱去甜椒种子中的TMV。这说明TMV辣椒株系有较强的抗逆性。

牛疱疹病毒Ⅳ型(DN-599株)DNA的分子克隆

童光志, Dieter Burger, David T Shen

1990, 5(4): 423

从感染的MDBK(牛肾)细胞中直接抽提出牛疱疹病毒IV型(BHV-4)DNA。分别经限制性内切酶EcoRⅠ,HindⅢ或BamHI消化后,用鸟枪法和选择法将病毒DNA片段克隆到质粒pBR322和pUC9的相应位点中,构建了三组病毒DNA基因库。阳性克隆是用光生物素标记的病毒DNA和牛胸腺细胞DNA与各重组质粒DNA杂交而筛选的。总共克隆了病毒基因组的94%,其中用EcoRI克隆了83.4%,BamHI克隆了63.4%,HindIlI克隆了45%

牛轮状病毒单克隆抗体的制备及其应用

何孔旺, 林继煌, 江杰元, 沈江萍, 黄宝顺, 李保同, 杨毓华

1990, 5(4): 430

以纯化浓缩的HN-7株牛轮状病毒(牛RV,从河南腹泻犊黄牛粪样中分离)作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆化筛选出2株(2C_7和3C_9)具群特异性的单克隆杂交瘤细胞株。2C_7与3C_9的小鼠腹水单克隆抗体(McAb)与牛HN-7、BRV007、BRV014及NCDV,猪Na86,猴SA-11和人Wa株RV细胞培养物的间接ELISA反应效价均达1∶10~5,但它们的HI和NT滴度分别≤1∶8和≤1∶100。McAb的Ig类别和IgC亚类检测结果2C_7为IgG1,3C_9为IgG2b。分别用3C_9 McAb和多克隆抗血清(PcAb)包被微量反应板进行粪样中RV抗原检测,共检测犊黄牛腹泻粪样36份、婴幼儿腹泻粪样40份,McAb和PcAb两系统检测结果的符合率分别达到97.2%(35/36)和100%(40/40)。

两种前S蛋白与HBV复制关系的初步研究

张永源, 鄢璞, 汪由坤, 喻植群, 郝连杰

1990, 5(4): 435

乙型肝炎病毒(HBV)前S基因及其产物的发现有助于认识HBV复制规律。一些研究提示:前S_1蛋白是完整病毒颗粒表面的必要成分,其存在与HBV复制密切相关,前S_1检测能敏感和特异地反映HBV复制状态。另一些研究则认为:前S_2蛋白含有人多聚白蛋白的结合位点,并提出前S_2蛋白为HBV复制的新标志。为探讨HBV复制与两种前S蛋白之间的联系,本研究应用原位分子杂交分析一组慢性肝炎患者肝细胞内HBV DNA,同时检测肝细胞内HBsAg、HBcAg与两种前S蛋白,综合分析两种前S蛋白在HBV复制中的地位和作用。