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1991年06卷1期

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Review

生物素标记核酸探针的分子杂交技术及其应用

曹先维, 张鹤龄

1991, 6(1): 1

核酸分子杂交是基于核酸链间互补碱基对的特异性结合,测定核酸碱基顺序同源性的一种现代技术,是基因工程、分子遗传及医学诊断中常用的方法。该法较常规诊断法灵敏度高、特异性强,目前,已广泛应用于重组DNA的筛选、基因分祈、染色体基因定位及病毒病诊断等方面。

鸭肝炎病毒感染和垂直传播的研究

李秋香, 郑玉廷, 李冬田, 田金霞, 张灏, 王立军, 任中原, 李伯绍, 张胜付

1991, 6(1): 15

用α-~(32)P-dATP-DHBV DNA探针做斑点杂交试验、检测了不同鸭种血清中携带DHBV情况。其中北京鸭与樱桃谷鸭的杂交种鸭杂交阳性率为5.1%;而不同鸭龄不同饲养条件的高邮麻鸭血清阳性率32.7—58.8%,经EM检测均在血清中找到病毒颗粒。将DHBV DNA不同的亲代配对所组成的四个组分群饲养,观察产卵后再孵化出的雏鸭DHBVDNA阳性率。第一组(♀-(?)-)为0%,第二组(♀+(?)+)为100%,第三组(♀-(?)+)28%,第四组(♀+(?)-)100%。然而亲代雌雄鸭均为DHBV DNA阴性的雌鸭所产卵在孵化到第9天时,经尿囊腔注射1×10~9病毒颗粒/m110μl的血清,孵出雏鸭时DHBV DNA阳性率达83.3%。

铬对增强心肌细胞抗病毒作用的研究

董杰德, 张爱萍

1991, 6(1): 21

本文研究了Coxsackie B_2病毒(XOX B_2V)对人及鼠心肌细胞的感染性以及三氯化铬对心肌细胞生长与对病毒感染佳的影响。实验结果证明人心肌细胞对COX B_2 V感染的敏感性比鼠心肌细胞高。三氯化铬能促进人与鼠心肌细胞的生长,促进鼠心肌细胞的搏动及搏动频率加快,并随着培养时间的增加,细胞生长代谢旺盛,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量升高。用含铬培养液培养的人心肌细胞对病毒感染的敏感性有所降低,人心肌细胞培养液中LDH的含量随病毒对细胞损伤的程度而升高。

BALB/C等乳鼠流行性腹泻(EDIM)的初步研究

吴小闲, 魏强, 宋怀燕, 施慧君, 秦川, 洪瑞珍, 苏树芸, 张新生, 卢耀增

1991, 6(1): 27

本文研究了1986—1989年间BALB/C小鼠发生的两次散发流行和一次有BALB/C及NIH鼠群暴发流行的EDIM(Epizootic diarrhea of infant mice)。经过电镜、PAGE、实验感染、“ABC”组化抗原定位等证实病原为MRV,而且病毒大小、RNA电泳型与国外报道的MRV有差异。观察了本繁育场内7个品系小鼠,均查出有MRV抗体,但发病只见于BALB/C和NIH鼠群。不同鼠龄和胎次发病率亦有差异。还观察了病变组织的病理组织学,扫描电镜和超微结构的改变。

反义脱氧寡核苷酸的抗SRS病毒活性

单易非, 纪宏, 裘慕绥, 王德宝

1991, 6(1): 33

本文研究了合成的反义脱氧寡核苷酸片段,包括修饰的和非修饰的,同聚的和异聚的脱氧寡核苷酸对SRS病毒感染细胞的增殖,细胞群落形成,xc融合细胞产生和逆转录酶活性的抑制作用。结果表明上述寡聚物对病毒都有抑制活性。小鼠急性毒性试验在高剂量下未见毒性。各种寡聚物的作用机制不同。

同位素与生物素标记的HCMV DNA探针检测婴儿肝炎综合症血和尿标本的比较

单易非, 纪宏, 裘慕绥, 王德宝

1991, 6(1): 39

用~(32)P和生物素标记的克隆化的人巨细胞病毒(HCMV)AD169株DNA片段作探针,采用DNA-DNA斑点杂交法,对照检测了27例婴儿肝炎综合症患者(血清学检测为非甲非乙型肝炎者)临床血、尿标本的HCMV-DNA。其中16份血标本呈阳性,占59%;9份尿标本呈阳性,占33%。初步结果表明,血标本中HCMV DNA检出率比尿标本检出率高26%。标记的~(32)P探针可检测10pg同源DNA,生物素探针可检测50Pg同源DNA,均不与其它疱疹病毒及未感染的人胚肺细胞DNA杂交。将其中26份血标本的HCMV DNA杂交结果与抗HCMV IgM ELISA检测结果相比较,符合率为65%。

乙型肝炎病毒持续感染患者细胞内病毒复制的研究

曾令兰, 熊开钧, 黄华芳, 何生松, 罗端德, 王心禾, 代家珠, 刘红艳

1991, 6(1): 43

用Southern blot技术对乙肝病毒感染肝脏和外周血白细胞的情况进行了对比研究,发现白细胞的阳性率为44%,肝组织的阳性率为46%,两者无统计学差异。根据琼脂糖凝胶电泳速度可将病毒DNA分子分为游离型、整合型和混合型,配对检查两者亦无明确相关性,说明外周血白细胞是乙肝病毒攻击的靶细胞,亦是病毒复制的场所。白细胞中病毒DNA游离型与血清学指标HBeAg(+),HBV DNA斑点杂交(+)关系密切,而整合型除与上述指标有关外,还和抗-HBe(+)有关,表明病毒在乙肝发病过程中复制和部分静止的差异。

分子杂交鉴定杆状病毒

吴中心, 蔡宜权

1991, 6(1): 49

利用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcNPV) DNA EcoRI-I片段作为同源探针,在35℃条件下,通过Southern-blot hybridization将斜纹夜蛾核型多角体病毒(Prodenia Iiturs nuclear polyhedrosis virus. PlNPV)多角体蛋白基因定位于其HindⅢ-A片段。以PlNPV DNA HindⅢ-A片段和PlNPV DNA HindⅢ-C片段分别制备探针,在不同的杂交条件下,对PINPV,甘兰夜蛾NPV(Mamestra brassicae nuclear polyhedrosis virus,MbNPV)油桐尺蠖NPV(Buzura suppresseria nuclear polyhedrosis virus,BsNPV)进行了鉴定。结果表明:由A片段制备的探针,在不同的杂交条件下,具有相应不同的非特异性,而由C片段制备的探针则具有严格的特异性。

应用免疫电镜技术快速检测菜豆黄花叶病毒、马铃薯M病毒和燕麦花叶病毒

陈剑平

1991, 6(1): 53

应用免疫吸附电流技术(ISEM)可有效地检测腐汁液中的菜豆黄花叶病毒(BYMV)、马铃薯M病毒(PVM)和燕麦花叶病毒(OMV)。BYMV,PVM和OMV三种抗血清的适宜工作浓度和对铜网的适宜包被时间均为1000倍和1小时,对同源病毒的适宜捕获时间分别为4℃下2、2和8小时。PVM和OMV的病汁液检测灵敏度均为稀释4000倍,而BYMV病汁液稀释16000倍时还能检测到少量病毒料子。ISEM捕获法和修饰法的结果表明,这三种病毒之间无血清学交叉反应。

兔出血症病毒核酸的某些理化性质的研究

孙松柏, 王汉中, 杨学楼, 罗经, 刘虹

1991, 6(1): 59

本文对我国无锡分离的兔出血症病毒A_2R-3毒株核酸的某些理化性质进行了研究。采用孚尔根染色、二苯胺反应和核酸酶解实验证实病毒核酸为DNA类型。吖啶橙染色、甲醛反应、核酸酶S_1消化和核酸热变性实验表明病毒核酸为单链型。核酸电泳呈单一组分。电境观察显示核酸分子链呈线状,平均长度约为2.15μ。计算分子量约为2.1—2.5×10~6d。核酸碱基组盛为A25.34、T29.37、G23.85、C21.43、(G+C)克分子百分比值为45.28。结合以前的报道、我们认为:兔出血症病毒可以归类于细小病毒科。

饮用水水源与自来水中病毒和指示细菌存在水平的比较研究

张楚瑜, 王祖卿, 李小锋

1991, 6(1): 65

自来水中人肠道病毒的存在已引起人们极大的关切和忧虑。本文报道了武汉东湖水和以东湖为水源的自来水中病毒和指示细菌的存在水平。水源水经过预加氯消毒、絮凝沉淀、砂滤和最后加氯消毒处理而成的自来水中细菌总数检测范围是41—500/升,总大肠菌是2—13/升、粪大肠菌为0—4/升、大肠菌噬菌体是0—13.6PFU/升,平均2.48PFU/升,肠道病毒为0—78PFU/升,平均为6.7PFU/升。水源水经制水工艺处理去除指示细菌、大肠菌噬菌体和肠道病毒的效率分别为97.95—99.99%,90.63%和53.18%。这种结果说明自来水制水工艺能有效地降低指示细菌,大肠菌噬菌体,而去除肠道病毒效率较低,揭示肠道病毒对环境压专的耐受性明显地比指示细菌强。

静电泳动核酸电镜技术

梁世平, 邓红, 张世敏

1991, 6(1): 71

本文提出了一种新的核酸电镜技术,即静电泳动核酸电镜技术。这种方法较常规的核酸展层技术操作简便,省工省时,节省试剂,效果令人满意。

原位化学切割法对油桐尺蠖核型多角体病毒两种相似多肽的比较研究

刘明富, 谢天恩

1991, 6(1): 75

油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)自1978年分离以来,对其形态结构、形态发生、毒力测定、血清学、理化特性、安全性试验、剂型研究及大田应用等已进行了广泛的研究,其基因组物理图谱也已构建。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)研究BsNPV蛋白质时发现,多角体蛋白与病毒粒子的一种主要蛋白质的分子量非常接近

甲肝病毒在人血白细胞中体外连续传代和在分类白细胞中增殖的研究

郑纪山, 李法卿, 林建汶, 潘秀珍, 谭维国

1991, 6(1): 79

1985年我们采用间接免疫荧光法(IF法)检测出甲肝患者外周血白细胞中有甲肝抗原(HAAg)存在,继而又将HAAg阳性白细胞直接种入PLC/PRF/5细胞,分离到两株甲肝病毒(HAV)NJ—3株和H—1株。为了弄清白细胞所携带的病毒究竟仅为吸附吞饮,抑或能在其中复制增殖,我们将分离到的HAV用正常人血白细胞进行体外增殖试验,现将结果报告如下。