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1997年12卷4期

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Review

HIV基因结构及其疫苗研究

金宁一

1997, 12(4): 258

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDs)危及全世界,成为本世纪难以治疗的 病毒病。病原体是反转录病毒科的人免疫缺陷病毒(human immunodefieieney virus,HIV)o AIDS叉叫获得性免疫缺陷综合症,是由于机体感染HIV后造成细胞免疫缺陷,抗感染能力下 降,以致伴有机会感染、恶性肿瘤及神经障碍等症候群的统称。

病毒的细胞膜受体

郭爱珍, 陆承平

1997, 12(4): 295

病毒受体是指能特异性地与病毒结合、介导病毒内化并促进病毒感染的细胞膜组份? 。 受体决定病毒的宿主范围、组织及细胞嗜性。研究病毒受体对了解病毒感染机制、病毒病的预 防与治疗、病毒分类等都具有十分重要的意义,因而近年来进展很快。本文拟对该领域研究成 果作一综述,旨在为今后的研究提供参考。

朊病毒的研究进展

王学, 田波

1997, 12(4): 302

八十年代以来,英国已报道有l7万多头牛染上疯牛病?。其原因被认为是由于牛饲辩中 添加了羊和牛的肉和骨粉,使羊的搔痒病(Scrapie)病原传染给牛,使之发生牛海绵脑病 (Bovine Spongiform Encephalopathy,BSE),俗称疯牛病。并且已确诊有l2个人因食用病牛肉 受到传染而发病? ,这在欧洲引起了极大的震惊和恐慌。现在认为这种病症是由朊病毒(P rj一 011)引起的。

单纯疱疹病毒致病模型的研究

罗军, 刘振安, 杨占秋, 肖红, 文利

1997, 12(4): 309

对单纯疱疹病毒(HsV)感染小白鼠致病特点进行了观察。小白鼠感染HSV第4天后开 始发病.感染后2 h血液内可分离出病毒.第48小时病毒血症水平和病毒检出率较高。不同组织 病毒分布不同,脑、神经节在感染后第72小时病毒滴度较高,心、肝组织在第5天达到高峰。结果 说明所建立的HSV致病模型可用于评价抗HSV药物。

在大肠杆菌中分别表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2

黄长形, 杨为松, 杭长寿, 白雪帆, 李光玉

1997, 12(4): 313

要利用PCR方法扩增了汉濉病毒76118株囊膜糖蛋白G1和G2的编码区基因,并将 PCR产物克隆到T一载体中,用限制性内切酶将G1和G2的编码区基因切下.并克隆到表达载体 pBV220中掏建G1和G2的表达质粒。诱导表达后在SDSPAGE凝胶中未见表达产物带,表达 的G1和G2能与部分抗Gl和G2的单克隆抗体发生反应.但用Westexn~blot方法不能检测到表 达产物。用表达的G1和G2免疫小白鼠能刺激小白鼠产生特异性抗汉滩病毒的抗体,同接免疫荧 光抗体的滴度可分别达到1:160和1:320。

用不同载体在大肠杆菌中表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2

黄长形, 杨为松, 杭长寿, 白雪帆, 李光玉

1997, 12(4): 322

为提高汉滩病毒囊膜糖蛋白G1和G2的表达水平,利用两种不同的表达载体pKK223一 3和pGEX一4T 1构建G1和G2的表达质粒.其中pGEX一4T一1为融合蛋白表达载体。诱导所 构建的G1和G2表遗质粒表达G1和G2.用表达的G1和G2免疫小白鼠诱导产生的抗汉滩病毒 特异性的间接免疫荧光抗体摘度无明显差别,从而说明表达载体对汉滩病毒G1和G2在大肠杆菌 中的表达水平影响不太.表达水平都较低。同时,利用pGEX一4T一1构建G1和G2的部分多肽的 表达质粒,但表达水平较完整的G1和( 2无明显提高。

丙型肝炎病毒NS4区基因的克隆、序列分析及其表达

陈庄, 杜勇, 潘文胜, 王学, 王海涛

1997, 12(4): 329

用RT-PCR法从一名抗-HCV阳性献血员血清中扩增到约900bp的DNA片段,经EcoRI酶切后插入pET17Xb表达质粒。SDS-PAGE表明重组质粒在约65kD处有融合蛋白表达,表达蛋白含量约为24%。对其插入片段进行序列分析:核着酸长度为945bp,A:T:G:C比例为18.6:21.9:30.5:29.0,G/C含量占59%,与其它一些HCV殊比较,核着酸同源性Ⅰ型为77.1%.Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型均<70%.Ⅱ型各株均>90%;氨基酸序列比较的同源性Ⅰ型为857%,Ⅲ、Ⅳ、ⅤⅥ型各株均>70%,Ⅱ型各株均>93%。NS4基因的克隆和表达为其基因和产物作用的进一步研究奠定了基础。

乙型肝炎病毒e抗原基因与绿色荧光蛋白基因的融合及其表达

岳莉莉, 齐义鹏, 邓岩卉, 吕利群, 邓小昭

1997, 12(4): 336

质粒pS65T含有T7启动子驱动的绿色荧光蛋白突变型gfpS65T基因,经修饰后,在其中插入乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)基因,使两基因同框成为融合基因。在大肠杆菌BL21中由于T7启动子的控制,高效表达了具有双功能(抗原性和发光性)的融合蛋白(GFP-HBeAg)。融合蛋白MW为52kDa,N端有6个组氨酸残基,因而用Ni金属螯合层析柱对融合蛋白进行了分离纯化,利用诊断HBV的ELISA试剂盒检测了融合蛋白的抗原性,在荧光显微镜下观察到了融合蛋白的绿色荧光。并探讨了用其组装成新型免疫诊断试剂的可能性。

黄芪A6组分对流感病毒感染小鼠的防治作用

左丽, 陈力, 唐晓敏, 郭辉玉

1997, 12(4): 342

用黄芪生药1250~5000mg/kg,连续给药小鼠5d,其A6组分对100LD50或100ID50感染的BALB/C小鼠都有明显的预防和治疗作用,可降低感染幼鼠的死亡率和延长其平均存活天数;降低感染成年鼠的肺湿重。经X2和t检验,有显著性差异。且预防效果优于治疗。早期给药疗效较好。

中国棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒多角体蛋白基因的序列分析

陈新文, 胡志红, JustM.Vlak

1997, 12(4): 346

以AcMNPV的多角体蛋白基因为探针,定位了中国棉铃虫单粒包理核型多角体病毒(HaSNPV)的多用体蛋白基因。序列测定表明,HaSNPV的多角体蛋白基因编码区为738个核苷酸,编码246个氨基酸,预计蛋白质分子量为29kDa。同源性分析表明,HaSNPV与美洲棉铃虫单粒包理核型多角体病毒(HzSNPV)具有最高的同源性,在整个阅读框架中只有4个碱基的差异,其中第179位碱基的变化导致唯一的氨基酸变化,这种变化并未导致其二级结构的改变。此外,两种病毒该基因的启动子结构也完全一样。HaSNPV与其它的SNPV和MNPV的同源性明显要低。结果预示HaSNPV与HzSNPV可能为同种病毒的不同变种。

两个猪瘟病毒野毒株gp55基因抗原编码区序列的分析及比较

李红卫, 涂长春, 吕宗吉, 金扩世, 殷震

1997, 12(4): 354

利用反转录-PCR方法扩增了吉林省猪瘟病毒(HCV)两个野毒株gp55基因的主要保护性抗原编码区,并将其克隆到pGEM-T载体中,然后用Sanger双脱氧法测定了其核苷酸序列,并推导了其氨基酸序列。将测定的这两个HCV野毒株的部分序列(350bp)与国内外已知的HCV序列进行比较,结果表明:这两个野毒株的核苷酸序列的同源性为94.9%,氨基酸序列同源性为97.4%,与1985~1992年意大利中部分离4个野毒株的同源性明显高于其它HCV毒株,核苷酸同源性分别为97.2%~98.3%和94.0%~949%,氨基酸同源性分别为98.3%~991%和97.4%~98.3%,而与我国的HCV标准强毒株即石门株的核苷酸同源性仅分别为83.1%和83.1%,氨基酸同源性仅分别为90.6%和91.4%。因此认为吉林省这两个野毒株与意大利中部的4个野毒株具有密切的关系,而与石门株很可能来源不同。

皱纹盘鲍一种球形病毒的感染及其发生

王斌, 李霞, 高船舟

1997, 12(4): 360

在发病的皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)幼鲍的足、内脏团、外套膜的血细胞质内,发现一种直径为90~140um的球形病毒粒子,带双层囊膜,无包涵体。负染病毒粒子与超薄切片大小形态相同。用被病毒感染的患病幼鲍感染健康鲍获同样症状,死亡率为50%。并于人工感染死亡鲍鱼体内观察到同样病毒。

应用光镜和电镜对病虾组织细胞病理变化的观察与分析

黄灿华, 张建红, 高玮, 石正丽

1997, 12(4): 364

应用光镜和电子显微镜技术比较研究正常与发病的中国对虾7种组织细胞病理变化,结果显示,病毒侵染后,对虾组织病理变化主要集中在消化系统的肝胰腺、中肠、胃等组织。在光镜下,可见消化道内壁上皮组织广泛受损,细胞大量坏死或空泡化;电镜下可见主要的细胞器如线粒体嵴大量断裂、粗面内质网严重扩张、溶酶体增生,病变细胞内出现大量变性的膜性结构等。观察结果为弄清对虾病毒引起的病症及致病机理打下基础。

免疫荧光检测HIV-1抗体方法的建立和应用

李敬云, 王宏霞, 鲍作义

1997, 12(4): 371

免疫荧光法检测HIV抗体是确认HIV感染的方法之一[l],与蛋白印迹法相比,它的特异性更高,易于鉴别非特异反应,更为经济、快速、容易操作。为了拥有更多的HIV抗体检测手段,我们用感染和未感染HIV-l的HeLaCD“细胞制备抗原片,建立了免疫荧光检测HIV抗体的方法,并进行了初步应用。材料和方法1细胞和病毒HeLaCD4”细胞,引自美国BruceChesebro博士的实验室,用含10%热灭活小牛血清的RPMI1640培养基培养和传代。HIV-l株引自美国。2血清艾滋诊断试剂国家参比品,批号9602Z16份经蛋白印迹确认的HIV抗体阳性血清;10份健康人血清Z10份责疽及肝炎病人血清;月份HIV抗体初筛阳性血清。3制备抗原片Hel,。CD4”细胞长成单层后,加入05ml。滴度为10‘TCID50的HIV一三,吸附lh后加入新鲜培养基,37℃培养3d将感染的细胞用025%的胰酶消化、洗涤,稀释成浓度为5。104细胞/mL的细胞是液,同样处理一瓶未感染的细胞,将感染和未感染的细胞等量混合,15“滴入Ic孔镀膜载玻片上,37℃、5%Cq条件下培养8h细胞长成本层后,用冷丙酮固定10min,封片,置一20℃保存备用。4...