For best viewing of the website please use Mozilla Firefox or Google Chrome.

1998年13卷4期

|     

Review

弹状病毒研究的新进展 Ⅱ.病毒的结构蛋白、转录、复制和核衣壳化的研究

沈加丽, 龚祖埙

1998, 13(4): 281

我们曾报道过弹状病毒的基因组结构研究的新进展,本文将对弹状病毒的结构蛋白及其功能区、转录与复制和核衣壳化研究的新进展作进一步的报道。根据弹状病毒在细胞内复制及装配的位置,可分为两个亚组。第一亚组其复制和装配在细胞质内,水泡性口炎病毒(VSV)为其代表...

大麦黄矮病毒分子生物学的研究进展

韩志勇, 赵章杏, 朱睦元

1998, 13(4): 292

大麦黄矮病毒(BarleyYelowDwarfVirus,BYDV)是黄矮病毒组(Luteovirus)中的一员。它只能通过蚜虫传播,广泛流行于北美、欧洲、东亚的大麦产区。大麦黄矮病主要引起大麦矮化,抑制分蘖,减少穗数,造成不孕以至不能结实。除大麦外...

人乳头瘤病毒16型E_6基因的T-A克隆及在真核细胞中的表达

栾怡, 于修平, 赵蔚明, 贾继辉, 周亚滨

1998, 13(4): 305

由于HPV16E6蛋白能诱导机体保护性免疫反应,可作为基因治疗的靶抗原。用杆状病毒昆虫细胞表达系统制备了HPV16E6基因工程蛋白,拟用于宫颈癌细胞系小鼠模型抗癌的免疫治疗。用PCR技术从HPV16基因组中扩增获得转化基因E6的完整ORF,按TA策略将其克隆到自行制备的杆状病毒转移载体pVL1393T尾载体中,置于杆状病毒AcMNPVPolh晚期启动子控制之下,用此重组转移质粒pVL1393E6与杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,经噬斑筛选获得带有编码E6蛋白基因的重组杆状病毒株,并在昆虫细胞Sf9中表达为非融合性E6蛋白。SDSPAGE电泳分析其分子量约为18kD,免疫印迹实验表明,此重组蛋白能被兔抗HPV16E6抗体所识别。

用鼠艾滋病模型评价虎杖水提液的抗病毒作用

蒋岩, 王红霞, 鲍作义, 朱关福

1998, 13(4): 311

以脾指数、病毒抗原阳性细胞、血清IgG和脾细胞对刀豆蛋白A的刺激应答为指标,用LPBM5C57BL/6鼠艾滋病模型评价了虎杖水提液的抗病毒作用。结果显示:虎杖水提液可以部分地抑制LPBM5病毒导致的C57BL/6鼠的脾肿大,免疫抑制和病毒血症;病毒接种前和接种同时给药效果较好,接种一星期以后开始的治疗对感染鼠的各项异常指标没有明显的改善作用,提示早期用药效果较好;持续给药可以部分地控制感染鼠脾肿大和脾细胞对刀豆蛋白A的刺激应答降低,但对高球蛋白血症的改善作用是非持续性的。

17种植物中蛋白质提取物的抗HIV-1活性

郑永唐, 贲昆龙, 金善炜

1998, 13(4): 320

以化合物对HIV1诱导C8166细胞形成合胞体的抑制实验和化合物对HIV1感染细胞的保护实验作为初筛方法,筛选了来源于7科17种植物的47个样品,其中8个样品经测定是核糖体失活蛋白(RIPs),其余为粗提蛋白。进而测定了初筛有抗HIV活性的化合物对共培养、急性和慢性感染的HIV1p24抗原表达水平的影响,用间接荧光染色检测这些化合物对HIV抗原阳性细胞率的影响,以确证其抗HIV活性。天花粉蛋白(TCS)、南方栝楼蛋白峰Ⅴ、南方栝楼蛋白峰Ⅵ均显著地抑制合胞体的形成;巴Ⅱ、丝瓜子蛋白、油瓜根蛋白、木盍藤子蛋白有一定的抑制作用。老鼠拖瓜蛋白、大叶木鳖子根蛋白、西双版纳根Ⅱ等粗提蛋白有显著的抑制作用。RIPs不能保护HIV1感染细胞的死亡。TCS显著地抑制了HIV1急性感染中p24抗原的表达,减少了HIV抗原阳性细胞数,但它们均不影响共培养细胞融合、HIV1慢性感染中p24抗原表达水平。结果表明,除TCS等已知RIPs外,还有一些新的RIPs具有不同程度的抗HIV活性。

人乳头瘤病毒16型湖北株E_7基因的克隆和高效表达

伍欣星, 赵文先

1998, 13(4): 326

利用基因克隆技术,将HPV16湖北株完整的E7基因克隆到含乳糖操纵子的表达载体pWR5901上,经限制性酶切分析获得重组质粒pWHBE7。pWHBE7转化大肠杆菌后表达产生分子量为70kD的融合蛋白lacE7,该蛋白在免疫印迹实验中可被标准E7单抗识别。经IPTG诱导后,E7融合蛋白产量可达细菌总蛋白含量的30%以上。利用lacE7蛋白在细菌胞浆中形成包含体的性质,简便地提取并纯化了该蛋白质。结果为从免疫学角度探讨HPV16与宫颈癌的关系以及HPV疫苗的研制打下基础。

流行性出血热尸检组织中热休克蛋白70mRNA的定位及分布

叶苓, 杨守京, 刘彦仿, 晏培松

1998, 13(4): 332

应用核酸原位分子杂交技术研究了国内不同地区30例流行性出血热患者尸检组织中病毒RNA及HSP70mRNA细胞内定位,同时观察了汉坦病毒感染的VeroE6细胞中HSP70的表达情况。结果表明,热休克蛋白70mRNA在多数组织中均可检测到,分布与病毒RNA一致,并且与组织的病理损害有关;体外实验的结果也表明在出血热病毒感染的细胞中有HSP70的高表达。提示热休克蛋白与汉坦病毒的致病以及流行性出血热的发病机理有关。

乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达

陈波, 刘惠, 任红玉, 苏成芝, 陈常庆

1998, 13(4): 333

用PCR法获得了HBsAgpreS1(1-65)肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子(hTNFα)之后,插入表达载体PSB-92中,使融合基因的5′端直接置于大肠肝菌PL启动子下游,采用30℃培养,42℃诱导,获得了TNF与preS1(1-65)融合蛋白的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为25kD,约占细菌总蛋白的35%。表达产物经Westernblot验证,能分别特异地与hTNFα抗体与preS1抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有TNF的生理功能(对L929细胞的细胞毒活性)。经DNA序列测定,preS1(1-65)肽基因正确地融合在hTNFα基因之后。该结果提供了一种制备preS1的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。

HIV-1 gp41基因的高效表达及表达产物的纯化

闭兰, 雷小军, 陈伟, 严家新, 余模松, 朱家鸿

1998, 13(4): 344

为了获得高效表达的人类免疫缺陷病毒(HIV1)gp41蛋白,从而为HIV1基因工程诊断抗原的国产化打下基础,用PCR的方法从HIV1全基因序列中扩增出编码gp41N端的690bp片段。经酶切后,克隆到pET28a载体中,再将重组质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,高效表达出gp41蛋白。间接ELISA、Westernblot、SDSPAGE电泳证实,该表达产物具有良好的抗原性和特异性,且表达量约占总菌体蛋白的45%。重组蛋白经金属鏊合纯化,纯度达99%。

复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒制剂对两种夜蛾的毒力测定

侯建文, 赵烨烽, 姚国强, 蒋伟民, 杨文勤

1998, 13(4): 350

对防治蔬菜甜菜夜蛾(SpodopteraexiguaHübner)和斜纹夜蛾(ProdenialituraFabricius)为主并兼治菜螟、菜青虫、小菜蛾等鳞翅目害虫的单一型和复配型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AutographacalifornicanuclearpolyhedrosisVirus,AcMNPV)生物杀虫剂进行筛选。毒力测定结果表明:选用单剂的AcMNPVA株(从甜菜夜蛾虫体增殖获得)的毒力(LD50=131.8PIB/头)比AcMNPVB株(从草地贪夜蛾细胞株Sf9中获得)的毒力(LD50=1949.4PIB/头)高14.79倍。AcMNPVA株加苏云金杆菌(Bt)加斜纹夜蛾核型多角体病毒(PlNPV)形成的复配型AcMNPVA株制剂对甜菜夜蛾二龄幼虫的LD50值(21.82~21.4PIB/头)与单剂AcMNPVA株的LD50值(168.84~204.36PIB/头)比值为9.5~7.7倍。同样复配型AcMNPVA株制剂对斜纹夜蛾二龄幼虫LD50(3.16~15.46PIB/头)与单剂PlNPVLD50值(16.02~53.53PIB/头)比值为5.1~3.5倍。说明以Bt和非耙标害虫病毒作为增效剂的复配型AcMNPVA株制剂对两种夜蛾害虫有明显增效作用。以复配型AcMNPVA株制剂形成的蔬菜复合病毒杀虫剂(SNB3)防治蔬菜重要鳞翅目五种抗性害虫取得良好效果。

从随机噬菌体肽库中筛选抗草鱼出血病病毒多肽的研究

王冰, 柯丽华, 江红, 田波, 李传昭

1998, 13(4): 351

从随机噬菌体九肽表位库中筛选出抑制草鱼出血病病毒(GrasCarpHemorhageVirus,GCHV873)感染的多肽分子。采用完整、生物素化的草鱼出血病病毒颗粒作为受体,与以融合蛋白形式在丝状噬菌体fUSE5的外壳蛋白Ⅲ的N端表达的随机九肽库作用。经三轮体外亲和筛选(Biopanning)及ELISA法检测后,从肽库中筛选出16个与病毒高亲和力结合的噬菌体克隆,其中六个阳性克隆能有效地抑制病毒在CIK细胞中的复制,并使病毒的半数组织培养感染剂量(TCID50)下降五个数量级。表明噬菌体肽库技术完全能够应用于抗病毒研究,为研制抗病毒短肽制剂打基础。

抗草鱼出血病病毒多肽的结构分析

王冰, 柯丽华, 田波

1998, 13(4): 363

将草鱼出血病病毒(GCHV873)颗粒与随机噬菌体九肽库在体外作用,三轮筛选后,从300个转化的单菌落中获得16个与病毒高亲和力的噬菌体克隆。接着经过抗病毒试验获得6个能强烈抑制病毒复制的阳性噬菌体克隆,能使病毒TCID50下降5个数量级。通过对阳性噬菌体克隆随机插入区域的核苷酸序列分析,推导出多肽的氨基酸序列。发现6个能强烈抑制病毒复制的阳性克隆中多肽的氨基酸序列完全一致(NH2LeuTrpValGlyGlyGlyArgAsnAla),该结果提示多肽的抗病毒能力与多肽特异性氨基酸组成及结构有关。因此,抑制GCHV873复制特异性多肽的氨基酸序列的确定及结构分析,不仅为人工合成抗草鱼出血病病毒的多肽奠定了基础,同时也为抗病毒多肽制剂的研制提供了依据。

痘苗病毒诱导HeLa细胞的凋亡

张小青, 陆宇, 丁明孝

1998, 13(4): 368

痘苗病毒感染HeLa细胞后形态学上出现了较典型的细胞凋亡特征,电泳分析显示出DNA阶梯,用DNA断裂原位检测技术发现其染色质断裂主要存在于核周,与染色质凝聚位置相似。

AC-PCR法检测连云港海域贝类HAV

赵文彬, 林红玉, 李家富, 王理兴, 龚海萍, 方肇寅, 王秋红

1998, 13(4): 372

为了解连云港海域贝类甲型肝炎病毒(HAV)污染状况,证实其在本地区甲肝传播中的媒介地位,我们应用抗体捕捉聚合酶链反应(AC/PCR)检测市售贝类的HAV,结果报告如下:材料和方法1贝类样品于1996年春、秋二季采集新浦区、连云区和赣榆县等地水产品市场...