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1999年14卷1期

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Review

一种新的人类疱疹病毒:Kaposis肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)

王世珍, 文淑红, 耿运琪

1999, 14(1): 1

人免疫缺陷病毒的受体与辅助受体

王学, 周莹, 田波

1999, 14(1): 7

人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)是引起艾滋病的病原。由于该病的病死率较高,目前尚没有被广泛接受的有效的医治方法,所以世界各国对艾滋病都十分重视。在感染HIV时,HIV首先与靶细胞上的(receptor)结合后,才能进入该细胞并在其内繁殖。所以充分地了解HIV 的受体及辅助受体(eoreceptor),对控制HIV 的感染和传播是至关重要的。

10株水痘带状疱疹病毒的分离鉴定与生物学特性

郑官增, 叶冬桂, 朱智勇

1999, 14(1): 11

用Veto E6细胞从12倒水痘及带状疱疹病^水疱液中分离到l0株病毒,分离阳性率为83 3%。10株病毒均具有使感染细胞圆缩、融合、脱落等典型的vzv 局灶性细胞病变(CPE)特点,CPE随着传代次数增加而加快 用带状疤疹恢复期病^血清作闻接免疫荧光染色镜检,可见典型的感染细胞核内荧光块。1O株病毒感染细胞制成的抗原片.检测5倒带状疱疹病^急性期及恢复期血清。荧光抗体滴度均有4倍以上增高。Vzv对Vero细胞敏感;对沙鼠肾,胎兔肾.胎豚鼠肾、肺、脾原代单层细胞不敏感;对乳小白鼠不敏感。毒种在一20℃保存一周内死亡;但在30%脱脂牛奶、20%小牛血清及10% 山梨醇Eagles液中,蔽体或真空冷冻干燥一100℃可保存二年以上。

HGV广东株和香港株NS5区部分基因的克隆及序列分析

马会慧, 杨绍基, 李刚, 陈雪娟, 廖家杰, 姚集鲁

1999, 14(1): 36

采用HGVNS5特异的2对引物,对两个香港株和一个广东株HGVRNA进行逆转录套式PCR扩增,PCR产物克隆入pUC19,重组质粒转化DH5和JM109菌株。PCR和酶切法鉴定阳性克隆,双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列并进行同源性分析。结果发现核苷酸变异呈散在分布,三株间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.3%~94%及97%~99.2%,与已报道的中国株(CN)相比,则同源性分别为90%~91.2%和94%~96.3%,与美国株(PNF2161及R10291)相比,为87.1%~89.5%和95.2%~97%,而与西非株(GBVC)相比,则达91.4%~93.8%和97%~97.9%。提示HGVNS5区核苷酸和氨基酸序列相对保守,不同HGV株存在一定的地区差异。

抗HsAg二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)基因的构建与表达

宋宏彬, 毛春生, 陈薇, 杜勇, 徐德忠, 王海涛

1999, 14(1): 42

采用PCR定点突变方法,成功地构建了抗HBsAgdsFv抗体的轻、重链突变基因,NdeI和EcoRI酶切后分别插入pET20b表达质粒,经测序证明在重链第44位氨基酸和轻链第100位氨基酸已突变形成半胱氨酸(Cys)。VH和VL重组质粒分别转化到大肠肝菌BL21(DE3)中,IPTG诱导后,经SDSPAGE电泳表明在12kD处有包含体蛋白表达,表达蛋白含量分别为28%和35%。VH和VL包含体蛋白经GuHCl变性后,等量混合在复性折叠液中结合,形成了一个约24kD并有一定活性的dsFv蛋白。抗HBsAgdsFv抗体表达及复性的成功,为今后基因工程抗体的研究及应用奠定了基础。

汉坦病毒陈株S基因编码区的克隆、序列分析及表达

薛小平, 徐志凯, 马文煜, 闫岩, 尹文, 张芳琳, 吴兴安, 赵茜, 白文涛

1999, 14(1): 48

从汉坦病毒陈株感染的VeroE6细胞裂解液中提取病毒RNA,经逆转录PCR获得病毒S基因编码区约1.3kbcDNA片段,克隆该片段后进行核苷酸序列测定,并与汉坦病毒76118株进行同源性比较,结果二者核苷酸序列同源性为86%,推导的氨基酸序列同源性为97%。将该基因片段插入原核表达载体pGEX4T1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物为GSTNP融合蛋白。SDSPAGE检测表达蛋白分子约72kD左右。Westernbloting和ELISA试验结果表明,表达产物可与多株抗汉坦病毒核蛋白的McAb发生反应,其抗原表位及McAb反应谱与76118株相比存在某些差异。

一例乙型肝炎患者体内不同HBV克隆的序列差异

房德兴, 甘人宝, 李载平, 翟春生, 周宗安

1999, 14(1): 52

采用PCR扩增、噬菌体克隆和核苷酸序列分析的方法对一例乙型肝炎患者体内HBV的HBsAg编码区和部分前S2区进行序列分析。结果发现同一患者体内获得的不同HBVDNA克隆间存在个别碱基的差异,而这种差异并非方法学本身产生的。由此得出的结论是,这种碱基突变反映了乙型肝炎患者体内HBV基因组实际存在的多态性。

粘虫核型多角体病毒凋亡抑制基因的定位、序列和启动子结构

彭艳华, 杨复华, 齐义鹏, 黄永秀

1999, 14(1): 58

以AcNPV凋亡抑制基因p35为探针,与LsNPVDNA的限制性片段和LsNPVDNAEcoRV片段杂交,发现EcoRV5.5kb片段有强烈的杂交信号。将此片段亚克隆后,测定了1244bp序列,发现一个完整的ORF,推导的302个氨基酸与AcNPVp35蛋白有70.4%的氨基酸同源性,证明所测ORF为LsNPV的p35基因。结构分析发现其5端有早期基因启动子元件GC、ACGT和TATAbox。有22bp的顺向重复序列,包括由两个重叠的TATAbox和上下游两个ACGTmotif组成的两套启动子元件,这些结构特征与AcNPV的凋亡抑制基因十分相似。

马铃薯卷叶病毒基因间隔区转化的马铃薯抗病性研究

董江丽, 李天然, 哈斯·阿古拉, 张鹤

1999, 14(1): 66

将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒(PotatoLeafrolVirus,PLRV)中国分离株的基因间隔区(intergenicsequence,IS)双链cDNA以正、反向两种方式分别构建于转化载体pROK2中,通过致瘤农杆菌介导,以马铃薯叶圆片为转化材料,转化马铃薯栽培品种Desire,获得了转基因植株。卡那霉素抗性分析和PCR检测目的基因,证明PLRVIS双链cDNA已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中。将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种PLRV,观察症状并用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测转基因植株中PLRV含量。结果表明,表达PLRVIS正意和反意RNA的转基因植株,接种病毒后表现无症状或症状轻微,PLRV平均滴度均较未转基因对照植株低。表达正意RNA的转基因植株PLRV滴度降低43%~72%,表达反意RNA的转基因植株PLRV滴度降低72%~86%,由此可见,表达PLRVIS反意RNA的转基因马铃薯对PLRV抗性较强。

侵染西番莲属(Passiflora)植物的五个黄瓜花叫病毒分离物的特性比较

徐平东, 李梅, 林奇英, 谢联辉

1999, 14(1): 73

从紫果西番莲(Pasifloraedulis)、杂交种西番莲(P.edulisXP.edulisvar.flavicarpa)、黄果西番莲(P.edulisvar.flavicarpa)、转心莲(P.caerulea)及龙珠果(P.foetida)分离到的5个黄瓜花叶病毒(CMV)分离物(PE、PE2、PEf、PC、PF)所作的生物学性质、理化特性和血清学关系的比较研究结果表明,5个分离物在寄主反应及血清学性质上存在不同,而在病毒粒体形态、体外抗性、蚜虫传毒和病毒外壳蛋白分子量方面无明显差异。根据5个分离物的寄主反应和血清学关系,可将其区分为CMV的两个亚组,其中PE、PE2、PC和PF属CMV亚组I,PEf属CMV亚组I。

用PCR扩增和克隆鸡传染性贫血病毒基因组DNA陈为民 崔治中 段玉友等(80)

陈为民, 崔治中, 段玉友, 刘岳龙

1999, 14(1): 80

根据已发表的序列,分别在鸡贫血病毒(CAV)环形基因组DNA(全长2.3kb)的EcoRI位点和BamHI位点的两侧选择适当序列合成两对引物,用PCR技术,从斑点杂交检测到病毒核酸的CAV感染的MDCCRP1细胞基因组DNA中,分别扩增出包含EcoRI和BamHI分割开的病毒基因组两部分(1.5kb和0.8kb)约1.5kb和约1.25kb的两个片段。再将其中相应序列拼接克隆进pUC18载体,获得包含CAV全基因组序列DNA片段的克隆质粒pCAV2.4。酶切分析表明,该质粒具有预期的BamHI位点、PstI位点、HindⅢ位点,而预期的EcoRI位点消失。重组质粒插入DNA片段的两端序列分析表明,质粒pCAV2.4是包含CAV全基因组序列的重组质粒,插入DNA片段序列中的EcoRI位点序列发生了一个碱基突变。

草鱼出血病病毒基因组的cDNA合成、克隆及部分序列分析

田静, 邹桂平, 方勤

1999, 14(1): 87

采用差速离心的方法纯化感染草鱼出血病病毒的细胞悬液。提纯的病毒粒子经蛋白酶K处理和酚氯仿抽提,在1%琼脂糖凝胶电泳条件下分离得到11条dsRNA,利用柱离心式胶回收试剂盒纯化各基因片段。纯化的dsRNA溶于90%的DMSO中,70℃变性15min,然后采用随机引物法反转录合成各基因片段的cDNA,并平头连接于pZErO2.0载体的EcoRV位点,电转化TOP10感受态细胞。重组质粒经酶切、PCR扩增得到大小不等的插入片段,cDNARNA斑点杂交的结果进一步证实其插入为目的基因片段。采用循环PCR测序的方法,对其插入片段进行了序列测定,对其中第11片段的部分序列作了报道。
Research Article

HIV-1抗体阳性血浆中HIV1病毒基因分型研究

钟平, 刘桂珍, 朱为, 段继良, 张依磺

1999, 14(1): 17

为了解HIV抗体阳性血浆中的HIV1病毒基因亚型的情况,应用逆转录PCR和DNA序列测定技术,对6份获自高危人群的抗HIV1阳性血浆进行序列分析和基因亚型分型的研究,结果表明均属HIV1B亚型。V3环氨基酸序列分析指出这些HIV1B亚型病毒株与泰国HIV1B亚型病毒株核苷酸和氨基酸序列相似;同时发现HIV1cDNA和氨基酸序列均相同,推测这6份标本可能来自同时感染同一株HIV病毒的感染者。本研究对了解高危人群中HIV1流行的遗传变异和HIV1亚型病毒株的分子流行病分析具有一定的意义。

HFRSV在平皿表面室温暴露后存活力的定量研究

李军保, 孟令英, 周煜, 姜黎, 鹿建春, 车凤翔

1999, 14(1): 23

将肾综合症出血热病毒布于玻璃平皿表面,室温条件下分别暴露0、30、60、90和120min,观察病毒的定量存活情况。结果在经过120min的暴露后,HFRSV的效价仍高达104.23TCID50。这一结果为HFRS的流行病学及其防治研究提供了重要的基础数据。

HFRS患者特异性IgA、IgE抗体及其免疫复合物测定

张东海, 孙辉, 高峰

1999, 14(1): 27

为进一步研究HFRS免疫损伤机制,用ELISA法同步测定了108例不同临床型、不同病日、病期HFRS患者血清中特异性IgA、IgE抗体以及HFRS病毒特异性IgA、IgE型CIC的水平及检出率。发现HFRSIgA型抗体在轻型病例高于中、重型病例;HFRSIgE型抗体及IgE型CIC在重型病例高于中、轻型病例。上述差异在病程早期(发热、休克少尿期,或是3~8病日)尤为突出。IgA型CIC则未见到上述差异。

云南省4种伊蚊的乙型脑炎病毒分离物的研究

张海林, 施华芳, 米竹青, 自登云, 龚正达, 侯宗柳, 李兆祥, 张云智, 张嘉玉, 杨兰萍

1999, 14(1): 32

在云南省西南边境9县市捕获伊蚊属雌性成蚊16种19367只,用细胞法和乳鼠法分离病毒。从185批6491只白纹伊蚊中分离到病毒2株,从50批1605只剌扰伊蚊中分离到病毒2株,从23批772只窄翅伊蚊中分离到病毒2株,从4批103只阿萨姆伊蚊中分离到病毒1株。其它12种共10396只伊蚊的病毒分离物为阴性。分离到的7株病毒经免疫荧光、酶免疫、血凝抑制和中和试验鉴定,均为乙型脑炎病毒(JEvirus)。白纹伊蚊是野外竹林的优势蚊种。分析认为白纹伊蚊在当地乙型脑炎病毒保存和传播中起重要作用,刺扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊亦可参与该病毒的传播。