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2000年15卷3期

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Review

EB病毒4种反义寡核苷酸片段对鼻咽癌SUNE-1细胞株的影响

朱振宇, 周元平, 张清秀, 高国全, 邓诣群, 马涧泉

2000, 15(3): 209

用不同浓度的EB病毒 4种 (BHRF1、DNA酶、核抗原 1及胸苷激酶 )反义寡核苷酸片段 ,(antisenseoligodeoxynucleotide ,ASO)分别与含 10 %胎牛血清或不含胎牛血清的人低分化鼻咽癌细胞株 (SUNE 1)共同培养 4 8h。结果仅适当浓度的BHRF1 ASO能引起无血清培养的SUNE 1细胞株增殖明显受抑制 ,透射电镜及琼脂糖凝胶电泳检测结果发现与SUNE 1细胞发生凋亡有关 ;而相同浓度的DNA酶、核抗原 1和胸苷激酶基因的ASO则无类似作用。

15株中国TT病毒基因型鉴定和部分序列分析

温淑娟, 黄镇华, 程群, 谷祯梅, 侯金林

2000, 15(3): 214

TT病毒 (TTV)为一种新鉴定的输血后肝炎相关的病毒。用聚合酶链式反应 (PCR)扩增TTVDNA序列核苷酸 1915到 2 185之间的片段 ,并将该片段克隆入 pGEM TEasy载体。重组克隆经酶切鉴定后 ,用全自动测序仪测序 ,发现本组病例中 15株TTV毒株间的同源性在 6 6 .8%到99.3%之间 ,与TTV日本株比较同源性在 6 6 .1%到 97.4 %之间 ,分析结果显示在我国不仅有国外已报告的不同基因亚型毒株存在 ,而且 ,分离到的 3株TTV毒株与日本株G1组和G2组的异源性分别达到 13.3% - 33.2 % ,可能为新的TTV基因亚型。

汉滩病毒核蛋白的分段表达及抗原表位分析

薛小平, 徐志凯, 马文煜, 尹文, 张芳琳, 闫岩, 吴兴安, 白文涛

2000, 15(3): 220

在大肠杆菌中对汉滩病毒S基因 4种不同长度片段的重组表达质粒进行诱导表达。结果表明表达的 4种GST NP融合蛋白均以不溶性包含体形式存在于菌体细胞内 ,表达量分别占菌体蛋白总量的 2 9- 36 % ,分子量分别约为 72kD、6 6kD、54kD和 4 4kD。Westernblot显示 54kD和 72kD融合蛋白用酶标抗汉滩病毒NPMcAb 1A8和抗GSTMcAb 3C11染色呈阳性反应。 6 6kD和4 4kD融合蛋白仅与酶标 3C11呈阳性反应。用凝血酶切去GST ,获得 4种汉滩病毒重组核蛋白(rNP) ,分子量分别约为 4 4kD、4 0kD、2 6kD和 16kD。用 19株McAb对表达产物做抗原位点分析 ,结果完整的rNP可与 19株McAb中的 13株反应 ,McAb反应谱与天然NP相同 ;S1.1kb表达产物 (N 端 1 37和C端 4 0 2 4 2 9位aa缺失 )和S 0 .5kb表达产物 (N 端 1 2 74位aa缺失 )与 19株McAb均不发生反应 ;S0 .7kb表达产物 (C 端 2 75 4 2 9位aa缺失 )可与 5株组特异性McAb反应。表明汉坦病毒核蛋白上的抗原位点主要存在于N 端 1 37位aa区段内。

脊髓灰质炎减毒活疫苗的高效纯化及特性研究

廖国阳, 姜述德, 郑从义, 李卫东, 王明秀, 陈光武, 王燕

2000, 15(3): 226

应用Q SepharoseFastFlow对Vero细胞基质制备的I型口服脊髓灰质炎减毒活疫苗悬液进行纯化。病毒液经滤过澄清和超滤浓缩 ,获得 85%的病毒感染性滴度回收率 ,而经Q SepharoseF .F .纯化的病毒悬液 ,病毒感染性滴度回收率达 10 0 %。纯化后的病毒液用 32 PdATP标记DNA探针膜杂交法测定 ,宿主Vero细胞基质DNA残余含量远低于 10 0 pg/剂量的标准 ;rct/ 4 0特征、病毒形态及病毒衣壳蛋白组份等生物学性状无显著变化。研究结果提示 ,Q SepharoseF .F .是Vero细胞制备口服脊髓灰质炎减毒疫苗的理想纯化材料。

三株散发性戊型肝炎病毒变异株的部分序列比较

杨军, 张华远, 王佑春, 毛群颖, 李河民

2000, 15(3): 232

对三株散发性戊型肝炎病毒Ch T11、Ch T2 1、Ch T4 0的部分基因组做克隆测序 ,经比较发现与其它国内外HEV株ORF2部分相应核苷酸序列同源性在 78.3 81.3% ,Ch T2 1与Ch T4 0的核苷酸同源性为 98.8% ,而Ch T11与前两者的同源性则分别为 89.8%和 90 .2 %。Ch T11、Ch T2 1、Ch T4 0与其它HEV株相应氨基酸序列同源性在 95.8 97.9% ,它们之间的氨基酸同源性则为 10 0 %。系统进化树分析显示 ,这三株HEV可能代表着一新型HEV。

肝癌组织中HBV核心基因启动子突变的研究

方钟燎, 杨进业, 王学燕, 庄辉, Roger Ling, Tim J Harrison

2000, 15(3): 234

为深入了解乙肝病毒 (HBV)致癌机理 ,用套式PCR对广西 14例血清HBVDNA阳性的原发性肝癌患者癌组织、10例乙型病毒性肝炎患者血清及 10例乙肝病毒无症状携带者血清HBV核心基因启动子进行扩增 ,阳性者用Sanger氏双脱氧法做序列分析 ,发现肝癌组织 10例PCR阳性 ,阳性率 71.4 % ,所有PCR阳性标本的整合体均有乙肝病毒核心基因启动子双突变序列 (nt 176 2AT ,176 4GA) ,并且在其周围各序列都有不同部位的点突变 ,标本C14核苷酸的缺失突变高达10个。乙肝患者 6例PCR阳性 ,其中 3例乙肝病毒核心基因启动子发生双突变。无症状携带者中 4例PCR阳性 ,其中仅 1例发生双突变。结果提示乙肝病毒核心基因启动子双突变在肝癌患者中较常见 ,肝炎患者次之 ,无症状携带者居最后。

戊型肝炎病毒(HEV)开读框架2中1.3kbcDNA的克隆与序列分析

蒋琳, 杨恭, 沈心亮

2000, 15(3): 237

以戊型肝炎 (HepatitisE)病人高热期血清为原材料 ,设计特定引物 ,经RT PCR扩增获得开放阅读框 2 (ORF2 ) 1.3kb基因片段 ,用EcoRI和BamHI插入克隆载体 pUC18,测定了该克隆基因片段的核苷酸序列并进行了比较分析。其片段长度为 130 9bp ,其A =2 4 9(19.2 % ) ,G =318(2 4 .2 9% ) ,T =339(2 5.9% ) ,C =4 0 3(30 .79% ) ;与印度株和缅甸株的同源性在 92 %以上 ,而与乍得和墨西哥株的同源性分别为 90 .7%和 77.4 %。

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

赵小东, 周建华, 丁清泉

2000, 15(3): 249

对蜀柏毒蛾核型多角体病毒 (ParocneriaorientaNuclearpolyhedrovirus,简称PaorNPV)形态结构、结构多肽、限制性内切酶图谱等特性进行了研究。采用不连续系统垂直板SDS PAGE分析了PaorNPV的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽。应用 5种限制性内切酶对PaorNPV基因组DNA进行了酶切分析。结果表明 :经热处理的多角体蛋白仅有一条带 ,分子量为 31.5kD ,不经热处理的多角体蛋白有三条带 ,分子量分别为 31.5kD、2 9.1kD、2 8.6kD ;病毒粒子包含有 2 5种结构多肽 ,分子量范围在 17.6 114.6kD之间。PaorNPVDNA经BamHI。EcoRI、HindⅢ、PstI和XhoI酶切分别产生 9、12、12、12和 14条片段。基因组大小平均为 12 4 .6kb。

马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)复制酶基因结构研究

张鹤龄, 梁成罡, 张彤, 哈斯阿古拉, 赵国芬

2000, 15(3): 255

用设计合成的两对特异性引物 ,以马铃薯卷叶病毒中国分离株PLRV ChRNA为模板 ,经反转录PCR扩增 ,将复制酶基因 3端 0 .6kb和 5端 1.2kb ,克隆于 pUC19中 ,分别构建了重组质粒pLR3和 pLR5,并分五段进行了序列分析。将获得的核苷酸序列及氨基酸序列与国外报导的四个PLRV分离株的相应区段的序列同源性进行了比较。结果表明具有高度同源性。文中对核苷酸序列中存在的可能移码序列和其下游的茎环结构或假节结构、以及特征性三次重复区及氨基酸序列中复制酶蛋白N端的碱性氨基酸序列以及C端区域中包括GDD在内的 8个特征序列进行了讨论。作者发现移码序列上游的三次重复的核苷酸序列可以形成连续折叠的互补双链区和发夹结构 ,这一结构可能和转译移码有关。此外PLRV复制酶蛋白N端部分氨基酸序列易变 ,而C端氨基酸序列十分保守 ,可能和复制酶功能有更重要关系。

猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究

余兴龙, 涂长春, 李红卫, 陈创夫, 李作生, 马正海, 孙明, 殷震

2000, 15(3): 264

构建了猪瘟病毒 (classicalswinefevervirus,CSFV)主要保护性抗原E2基因 4种不同的真核表达质粒。小鼠免疫试验表明 ,E2基因上不同的功能区对基因疫苗的免疫应答有很大影响 ,有信号肽序列的E2基因可诱导产生特异性免疫反应 ,且无跨膜区序列的E2基因所诱导的免疫应答反应比有跨膜区序列的强 ,而无信号肽序列的E2基因则不能诱导产生CSFV特异性的免疫反应。攻毒保护试验表明 ,免疫家兔最少可抵抗 10个最小感染剂量 (MID)的猪瘟兔化弱毒苗 (Hogcholeralap inizedvirus,HCLV)的攻击 ;免疫猪可抵抗致死剂量的CSFV石门株强毒的攻击。

应用RTPCR检测流产胎儿组织中猪繁殖与呼吸综合征病毒

蔡家利, 姜平, 蔡宝祥

2000, 15(3): 272

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)美洲型膜蛋白和核衣壳蛋白基因序列 ,设计了一对含有EcoRI和BamHI酶切位点的引物 ,用RT PCR对四个流产猪场的病料进行了检测 ,扩增出约 918bp的基因片段。通过病毒分离、酶切鉴定和序列分析证实为PRRSV感染。结果说明应用所设计的引物进行RT PCR快速检测PRRS是可行的 ,为我国快速特异诊断PRRS和PRRSV强毒株的深入研究奠定了基础。

福州地区对虾白斑病病毒的超微结构

郭银汉, 林诗发, 杨小强, 张诚, 谢联辉

2000, 15(3): 277

在福州地区分离到一种高致病性的白斑病病毒 ,该病毒仅存在于细胞质中 ,完整的病毒粒子有囊膜 ,一端略圆 ,一端稍尖 ,直径约为 80~ 10 0nm ,囊膜与核衣壳之间的间隙约为 2 0~ 2 5nm。该病毒在细胞内不形成包含体 ,但有些可形成封入体。负染观察到的病毒核衣壳呈直杆状 ,但长度和直径相差较大 ,最长的病毒超过 6 0 0nm。这些特征与其它已报道的白斑病病毒有所不同 ,因此暂将它称为对虾白斑病病毒福州分离株。

猪生长激素基因在杆状病毒载体系统中的表达

欧阳菁, 魏平华, 杨林, 谢明权, 杨洁, 龙綮新, 王珣章

2000, 15(3): 285

通过对猪生长激素 (pGH)基因的cDNA进行测序 ,得到 pGHcDNA的全序列 ,并与Seeburg等报道的序列进行了比较和讨论。然后利用具人工合成启动子和多角体蛋白XIV启动子的转移载体质粒 pSXIVVI+ X3/ 4构建出含 pGH基因的重组质粒 pX3/ 4 pGH。将 pX3/ 4 pGH与致死缺失型线性化AcMNPV OCC- DNA共转染Sf9细胞 ,构建出既能形成多角体又能表达 pGH基因的苜蓿丫纹夜蛾核多角体重组病毒AcMNPV pX3/ 4 pGH OCC+ 。感染重组毒株的Hi 5细胞可溶蛋白及其培养上清的SDS PAGE和Westernblot的分析结果表明 ,感染细胞的蛋白电泳带的 2 0 .7kDa处有一条猪生长激素特异带 ,但培养上清中没有。凝胶黑度扫描估测结果显示 pGH蛋白占细胞可溶蛋白的 4 .4 8%。

大熊猫犬瘟热病毒附着或血凝蛋白基因的序列分析

何洪彬, 李金中, 夏咸柱, 余春, 范泉水, 黄耕, 邱薇, 殷震

2000, 15(3): 291

首次对犬瘟热病毒 (CDV)大熊猫 (GP)毒株附着或血凝蛋白 (H)基因进行了序列测定并与疫苗株Onderstepoort进行了比较。我们设计合成了 4对引物 ,对GP株进行了RT PCR扩增与测序。H蛋白基因全长为 194 6bp ,开放阅读框架 (ORF)始于 2 1 2 3位的ATG ,终止于 184 2 - 184 4位的TGA ,编码 6 0 7个氨基酸 ,该基因序列已被GenBank收录。将GP毒株与GenBank中疫苗弱毒株Onderstepoort进行比较 ,二者核苷酸序列的同源性为 91.4 % ,推导的氨基酸序列的同源性为 90 .2 % ,GP和Onderstepoort株H蛋白的半胱氨酸残基数目均为 12个且相对位置不变 ;疏水性有一定的变化 ,但推测的穿膜区位置 (约 35 55位氨基酸 )是一致的 ;Onderstepoort株的H蛋白潜在的N 联糖基化位点为 4个 ,GP株H蛋白为 9个 ,糖基化位点的不同可能对GP株H蛋白的抗原性产生影响。

鳜鱼病毒病原及细胞感染特性的研究

方勤, 艾桃山, 邹桂平, 喻运珍, 刘家欣, 汪亚平

2000, 15(3): 297

在患暴发流行性发病鳜鱼的脾、肾、肝、鳃组织细胞的超薄切片中观察到直径为 12 0 150nm的二十面体病毒粒子 ,其截面呈六角形 ,有囊膜。将病鱼内脏与 10倍体积的PBS缓冲液制成组织匀浆液 ,过滤除菌后感染对数生长期的草鱼肾细胞。结果表明 ,该感染液在 2 8℃条件下 ,培养 36 4 8h ,生长旺盛的草鱼肾细胞开始出现CPE ,5 7d感染的单层细胞逐渐脱落死亡。该细胞病毒悬液具有感染性 ,可持续稳定地进行传代培养。感染细胞的病毒培养液 ,经差异离心纯化 ,负染制片 ,电镜下观察到大量的病毒粒子 ,对照培养物中未发现任何病毒颗粒。

用简并寡核苷酸探针筛选对虾白斑综合征病毒DNA多聚酶基因片段

石正丽, Durand Stephanie, Bonami Jean-Robert

2000, 15(3): 302

根据一些病毒的DNA多聚酶氨基酸序列中特有的保守序列VYGDTD设计的简并寡核苷酸 ,经地高辛标记后与对虾白斑综合征病毒基因库克隆杂交 ,筛选出一段长度为 70 7bp的EcoRI基因片段 ,该片段在一个开放阅读框内。并含DNA多聚酶B家族特有的保守序列YGDTDS。经与基因库比较 ,其氨基酸序列与藻类DNA病毒科 (Phycodnaviridae)的几株藻类病毒的DNA多聚酶片段有部分相似 ,因此推测该核苷酸片段为对虾白斑综合征病毒DNA多聚酶基因的部分序列。

HCV全长NS3基因表达及在抗体检测中的应用

张斌, 叶林柏, 郜金荣, 徐进平, 阮华, 王晓玲, 赵月娥

2000, 15(3): 308

丙型肝炎病毒 (HCV)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子。被HCV感染的病例中 ,超过 5 0 %以上会引起持续性感染、慢性肝炎 ,最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1] 。HCV严重威胁人类健康 ,但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段 ,因此 ,严格把好血源关 ,提高对丙肝?..