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2001年16卷1期

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Research Article

广东地区1996年流感暴发的分子变异基础

黄 平, 沈桂章, 倪汉忠, 周惠琼

2001, 16(1): 1

1996年广东地区流感毒株发生明显的血清学抗原漂移;引起广东地区流感暴发的分子基础是流感毒株HA 基因编码的A、B、C、D和E五个抗原决定簇位点变异.尤其是A、c、E位点发生氨基酶改变;而受体位点的氨基酸改变对此流感流行未发挥明显影响。HA基因编码氪基酸的第145号和第193号位点变异导致流行毒株的生物学特性改变,即分离株适应于MDCK细晦株生长。而难 适应鸡胚生长环境。

鼻咽癌中EB病毒LMP1激活TRAFs韵初步研究

王承兴, 李晓艳, 顾焕华, 邓锡云, 曹 亚

2001, 16(1): 6

在EB病毒潜伏膜蛋白LMP1介导的信号传导通路中.TRAFs作为LMP1活化的第一位信号分子,可能扮演 着重要的分子开关佑也 令^关注的是,在上皮性肿瘤NPC的发生中,EB病毒LMP1髓否激活重要的TRAFs情 号舒子‘ 究竟激活何补 I’RAFs信号分子,激活的机制何在?将LMP1 eDNA导八LMP1表达阴性的HNE2中.建 立稳定表达I MP1的鼻啊螂细胞系:HNE2.I MPI。以此为材料.应用差异RT—PCR和We,rern blottirtg法证实,无 沧在RNA水’ 迁址 I 『水平J .TRAF1在HNE2一I.MP1中表达鞍HNE2强.而TRAF2及TRAF3在HNE2. I,MP1 HNE2细咆【{1 然止明显差异;进⋯步用免疫共沉淀一We.stern blotting证实LMP1可使TRAFI、TRAF2 I’RAF3磷酸ILi~i设活1t 选些结果提示在鼻咽癌中.I MP1可能诱导TRAF1表述,而对TRAF2段TRAF3并不 影响.但[.MPI Tif磷睦化 rRAF1、TRAF2、TRAF3而使其功能性活化。

汉坦病毒感染诱导乳鼠脑神经细胞表达热休克蛋白70

赵君, 杨守京, 刘彦仿

2001, 16(1): 11

生后2~3 的昆明乳鼠.每只腹腔接种0 05 mL 100十半数致死量的陈株汉坦病毒,于接种后不同时间点 处死动物,取其帖组织常规固定,石蜡包埋制备5岬连续组织切片,用免疫组化法拉测组织中的病毒抗原及热体 兜蛋白70的表造,用j 聚焦显微镜观察二者之间的关系。结果发现,感染了病毒的组织能够稳定地拉测到热休克 蛋白70的表达.而病毒 I 的组织则检测不到热休克蛋白70的表=选.且二者有共定位关系,其分布与组织病变 一 致 这与在病毒感染的VeroE6细胞及EHF病人尸检组织中得到的结果一致.说明病毒感染可诱导热休克蛋白70 的表达.后者可能具有保舟’’ill织避免或减轻损伤的作用

汉坦病毒中国疫苗株Z37M 片段的克隆及序列分析

朱函坪, 刘合宾, 姚苹苹, 朱智勇

2001, 16(1): 15

汉坦病毒7-37株足从榻家鼠体内分离到的,用于生产取价肾综合征出血热疰苗的病毒毒株之一,血清分型为 SEO型 利用RT-PCR ‘法扩增Z37株M 基因片段eDNA,克隆入质粒载体,进行核苷酸序列测定及分析。Z37 株M基固片段由3651十椅苷酸组成,只有一十开放读码框架,共编码1133个氨基酸。与HTN型病毒(76 118、 A9、HV一114)的核苷酸干¨氰基酸同源性分别为71 8%~72 1%、76 2%~76 7%,与SEO型(R22、L99、80—39)的核 苷醍和氮基酸同源性讣 为95 3%~96 1%、95 3%~98 9% 这一结果的获得进一步从分子水平确定了Z37株 的型别,井为研制M肇 段重组疫苗打下基础。

传染性支气管炎病毒江苏分离株核蛋白基因序列测定与同源性分析

陈德胜, 潘杰彦, 贾立群, 蔡宝祥, 陈溥言

2001, 16(1): 22

将本室鸡传染性正气管毙病毒(IBV)江苏省地方分离肾型毒株Js/95/03接种鸡胚.分离、纯化病毒。提取单 股RNA做为反转录.聚台酶链反应(RT—PCR)的扩增模板。用Genhank公开序列多重比较后设计一对引物,使用 单管RT—PCR方法,特 扩增IBV核蛋白(N)基因5‘端854 bp的片段。扩增产物纯化后测序.序列分折表明.IBV N基因也存在较大变异.此毒株与呼吸型疫苗株M41序列同源性最高。

新型戊肝病毒ORF3和部分ORF1基因的序列分析

王佑春, 张华远, 辜文杰, 李河民

2001, 16(1): 28

用RT-PCR方法对2例感染新型HEV的样品进行了检测,井对PCR产物进行了克隆及测序。捡测结果显示用 常规PCR检谢易造成ORF3中GC丰富区的缺失、但在常规PCR反应液中加入GC mdt溶液可成功地扩增GC丰富 匡 序列分析显示_r1种I TI1属于同一基因型、但不同于巳报道的HEV l型、ll型和l【I型.为一新的基因型 T1和 T11与 在该区的核f 酸同源性为79%~82%;与l【型的同源性为8【I%-81%;和lIl型的同源性为83%-85%

山东省归国劳务人员中HIV.1感染毒株的序列特征和亚型分析

苏生利, 邢 辉, 刘传新, 潘品良, 黄 涛, 傅继华, 赵世立, 邵一鸣

2001, 16(1): 34

为了解自1992年以来,山东省归国劳务人员HIV.1感染毒株的分子漉行病学特征。我们采集了11份确认 为HIV-1感染者的垒血分离单核细胞(PBMC),提取前病毒DNA.用套式PCR扩增HIV一1膜蛋白(删 )基因,井对 其 C2-V3区进行序列测定和分析。结果表明:l0名归国劳工人员及1名归国劳工配偶的样本经序列测定和基 因分析发觋了HIV-1的4种基因亚型:A、B、C、E亚型。其中C亚型7名,B亚型2名,A和E亚型各1名。由此可 见;山东省归国劳务人员LI1 HIV一1毒株的感染情况软复杂.通过计算发现这些毒株间的基因离散率相差较大。提 示应加强归国劳务人员的教育、检测和控制 防其它国家毒株传人。

HCVE2区基因的分子克隆及序列分析

张东伟 梁布锋 祁自柏 凌世淦

2001, 16(1): 40

用RT PCRKIT从西安血站大样抗HCV阳性血清中筛选出HCVRNA阳性血清 ,提取HCV的RNA ,利用随机引物反转录合成其cDNA并进行半巢式PCR反应。将纯化的PCR产物酶切后与表达载体PET 2 2b+连接 ,经过双脱氧末端终止法双向测序 ,得到 85 2bp长的核苷酸序列。通过将该序列与已知不同型的HCVE2序列比较得知 ,此序列正是HCVⅡ型目的基因

甘蔗花叶病毒3’末端基因的克隆及外壳蛋白序列分析比较

李利君, 周仲驹, 谢联辉

2001, 16(1): 45

选取我国SCMV化势株系A株系的分离物sci~v.CA为材料,经过病毒和病毒RNA的提纯.反转录获得病 毒cDNA,并克隆到载体pUCI9的Sma l位点上,筛选得到多个重组质粒。选取其中一个克隆SCMV·CA54进行 测序.得到一个垒长为1 296 bp的核苷酸序列。这段序列由一个长为1 O44 bp的开放阅读框架(ORF)和一个长279 bp的3。末端非编码区序列(3’.UTR)及poly(A)尾巴组成。这个ORF包括病毒完整的外壳蛋白(cP)及部分核内 含体蛋白b(NIb)基因序硎。将所得序列同已知SCMV亚组中各株系分离物的核苷酸和氨基酸进行同源性比较. 结果表明该序列与其它株系分离物cP核苷酸序列的同源性介于63.7%~77.6%之同,氨基酸的同源性介于64% ~ 89%之间。根据马特薯Y病毒属的序列同源性划分标准,SCMV.CA与其它株系或分离物的同源性关系均舟于 种与株系划分标准之间。这是我国首次报道SCMV CP基因序列。

建兰花叶病毒运动蛋白基因克隆及序列分析

刘志昕, 吴豪, 潘俊松, 郑学勤

2001, 16(1): 51

从建兰花叶病毒(CyMV)石斛兰分离物中提取病毒RNA、用反转录—— 聚合酶链式反应(RT.PCR)方法获 得约500 bp的运动蛋白箍因片断,插入pGEM T载体克隆并测序。序列分析表明,该基因片断由474个核苷酸组 成,和CyMV美国夏威爽讣离物、新加坡分离物相应基因核甘酸序刊分别具有97 8%同源性{根据核酸序列推导 该片断含有3个部分重叠的开放阅读框架(ORF),分别编码14kD、12 kD和10 kD的多肽。

番木瓜抗病突变体阻碍环斑病毒体内运转

周国辉, 李华平, 张曙光, 范怀忠

2001, 16(1): 55

摘要:应用RT-PCR一 法拉测了PRSV Ys株系在感病番木瓜及其抗病突变体植株体内的运转动态 结果表明:在 感病植株中,接种后48h r按种叶的未接种部位可检出病毒,第4天部分接种叶柄可检出病毒,第6天植株各部位均 能检出荷毒;而在抗病植株 ft,接种后可以而且仅脂在接种部位检出病毒;因而认为抗病突变体能够阻碍病毒从接 种部位运出及(或)向米接~t,gt5位运入。

接种不同毒力的马立克氏病病毒后鸡病毒血症的动态比较

殷俊, 崔治中

2001, 16(1): 59

1日龄非免疫鸡分5jII接种马立克氏病病毒(MDV)I型强毒GA抹、I型MDV疫苗毒CVI988株和llJ型火鸡疱疹 病毒(}ⅣT)疫苗抹后第4 H起.定期采血并用抗MDV囊膜塘蛋白B(gB)单克隆抗体舟导的间接免疫荧光试验检测 MDV在外同血液单棱细胞(pBMCs)中的感染状况。结果发现.自接种【型强毒GA抹后第4日到鸡发病死亡前。都 能检出GA株引起的病群皿症.并于2周左右达到高峰;白接种CVI988株后第4日到第20日止.能检出病毒血症。并 于第8天左右达到高峰; 接种}ⅣT后第4日到第16日止.能检出病毒血症.并于第6天左右达到高峰。与此同时. 将GA株病毒血症的IFA舱}91I结果与细胞培养上病毒空斑计数试验结果比较。发现IFA试验比空斑计数试验更为敏 感。本试验既可用于翔断对鸡作MDV疫苗免疫的接种效果.叉可用于检涮MDV野毒感染状态。

狂犬病毒核蛋白(NP J的纯化及其免疫原性的研究

苏焱, 王继麟, 杨想平, 薛红刚, 朱家鸿

2001, 16(1): 64

摘要:对重组痘苗病毒和重组杆状病毒表达的狂犬病毒NP及原代地鼠肾细胞培养的狂犬病毒核衣壳蛋白(RNP) 先经Sephar~eCI 4B分f筛柱初步提纯,再以抗狂犬病毒NP McAB 2C12.Sephar~e 4B亲和层析柱纯化分离.经 El [SA.SDS-PAGE电泳和Western—Blot分析证实 获得了高纯度和免疫反应性的NP和RNP 以相同剂量的纯化 蛋白免疫小鼠.RNP和『II『种蓐组NP均可诱生特异的抗NP抗体,三种蛋白问无明显差异;狂犬病毒CVS株攻击保 护实验结果显示,三种 免疫的小鼠存活率约为50% ;两种重组NP的免疫反应性和免疫原性与天然狂犬病毒 RNP相似。

禽白血病病毒J亚群env基因的克隆和序列分析

秦爱建, 崔治中

2001, 16(1): 68

摘要:应用多聚酶链反心(PCR)的方法扩增出ADOI..4817毒株的囊膜蛋白帆 基因,并克隆进大酾杆菌。经核酸 序列分析 明 t,艇⋯的人小为1 746 bp 其中gp85和gp37由1 554 bp组成,可翻译成517个氨基酸,分子量为 57 7 kD 橄据精晕化他 N X S/T的特点,发现ADO1,4817的删 蛋白有15个潜在的糖基化位点。同源性分 析证明.ADOI,4817 , 与其它Al v_J的e 基因序列同源性为88 8% ~92 4% ,而与外源性Al vs的相 应序列的同源性仅为40 5%~51 4%,然而.与内源性的EAV—HP毒株的类帆 基因的同源性高达91 2%;另外, ADO[ .48I7毒株的gp37 C末端多了l3十氨基酸 这些结果提示,AI.v.J的eFt~,基因存在广泛的变异性, 基l 可能来源于内源~rl!f1]外 性AI Vs的重组。

从云南省蝙蝠脑组织中分离出乙型脑炎病毒

张海林, 张云智, 黄文丽, 米竹青, 龚鹤琴, 王静林

2001, 16(1): 74

摘要:为进一步阐明蝙螭 保存乙齄病毒中的作用.于1997年7月.在云南省耿马县捕捉蝙蝠64其,取齄组织作病 毒分离.从一只盒管鼻蜗脑组织中分离出1株病毒。该毒株能引起BHK21细胞病变和乳鼠发病死亡.在pH5 75~ 7.4对能凝集鸽红血球.疑用单克隆抗体血凝抑制和免疫荧光试验鉴定,证实为乙型脑炎病毒。进一步证明蝙蝠在 己型脑兜病毒保存和扩敬中具有重要作用。从金管鼻蝠体内分离出乙型脑炎病毒届国内外首次报遭。

禽白血病病毒p19基因末端片段在大肠杆菌中的表达

刘公平, 赵振芬, 刘福安

2001, 16(1): 78

根据禽白血病病毒(A1 v)p19基因末端序列台成一条82 bp的积链DNA片段,将其克隆到表达质粒pGE. MEX一1中.序列分析结果与设计的相符。重组表达质粒转化的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后产生34kD融 台表达产物,与理论值相符;Western.blot分析表明该表达产物能与免抗ALV血清发生反应。

对虾白斑综合征杆状病毒同源性比较的研究

黄灿华, 石正而, 张吕平, 解云礼, 张立人, 陈棣华, 吴清江

2001, 16(1): 81

比较我国沿海不删海域对虾白斑综合征杆状病毒三十分离株:即唐海分离株(渤海湾).宁渡分离株(东海). 豫圳分离株(南海)的同 性 三十wsSv分离株基因组的限制性内切酶(Sac l,H/ndIll,Pst I)酶切多态(RFI P) 以及病毒结构蛋白图谱先全一致.证实造成我国从南至北对虾爆发性流行病的对虾白斑杆状病毒为同一种病毒 利用高保真Taq酶.分别以针i道的日本对虾扦状病毒(RV—PJ=PRDV).斑节对虾白斑综合征杆状病毒(WSBV= PmNOBII1)基因组核酸 段特异性引物进行PCR扩增.结果均能从中国耐虾白斑杆状病毒(WSSV)基因组中扩增 得到相应大小的I:K~R产物.扩增产物序列分析表明中国对虾白斑杆状病毒(wssv)与斑节对虾白斑综合征杆状病 毒(WSBV=PmNOBIII).1l丰对虾扦状病毒(RV—PJ:PRDV)同源率分别为100%与97%.其结果为证实亚洲及 太平洋地区对虾自斑综舟 }r状病毒为同一种病毒或同一种病毒的不同株系提供了证据。
Brief Reports

大黄在体内抗柯萨奇病毒B3的实验研究

申元英, 杨占秋, 刘建军, 肖红, 郭广松

2001, 16(1): 85

In order to search a effective therapy for viral myocardifis,antivial activity of Rheum offici— hale on Coxsackieivirus B3(CVB3)was evaluated in BALB/C mice.After being determined optium scheme with orthogonal design,mice infected with CVB3 were treated with Rheum officinale.rib— avirin and 0.9% NaC1 The survival rates of the mice were 35% ,5% and 5% ;M ed Jan survival time were 23.11 and 10.5 days;Infectious viml titers repecfively,The lesions of cardiac tissues lightened were 10一 ,10一 ’and 10一 ’TCID50/0.1 mL inmicetreated withRheum offinicale.These re— suits showed that Rheum officinale was effective in treatment of CVB3 infected mice The study pro— vided scientific basis for further research and widen antiviral spectrum of Rheum officinale

SABC法和胶体金标免疫电镜观察 体外感染细胞中HCV—NS5的表达

叶进, 曾令兰, 杨木兰, 罗端德, 郭劲松

2001, 16(1): 88

To study the expression of HCV non.structure 5 antigen in vitro,a human HepG2 cell Iine was incubated with a HCV RNA positive serum.The SABC immunologieaI techniques and gold.1abeled colloid electron microscopy method were employed tO examine for the viral proteins in those calls.The HCV non.structure 5 antigen was first detected in the HepG2 cells at 72 hours poSt ineubation.The antigen WaS continuously observed in the cytoplasm or on the membrane O.S we1I on the eell wall of the HepG2 ceils even after 1.2,3 and 4 weeks post incubation.The observation of HCV non.structure 5 antigen continuously expressed in the HepG2 cells strongly indicates that the cells may have been in. fected bv HCV virus and the virus ma y have replicated in the ce lls.Therefore.the HepG2 eell line may be served as a potentiM host for establishment of HCV infection and propagation in vitro

斑点杂交检测对虾白斑综合征病毒青岛株在螯虾体内的动态分布

朱建中, 夏晓勤, 陆承平, 郭福生

2001, 16(1): 92

A fragment sized 40Obp ofWhite spot syndrome virus(WSSV,formerly designatedNOSV), recovered from recombinant plasmid pAFD.was labeled with Digoxigenin as a probe to detect dynamic distribution of WSSV within 120h and 72h in crawfishes(Cambarus procla ii)inoculated WSSV by oral taking and injection respectively.Stomach epithelium, intestine epithelium, heart, gill, haemolymph,muscle,hepatopancreas-hypoderm ,connective tNsue and ovary of infected crawfishes were examined for W SSV In both groups.W SSV was first detected in heamolymph at 12h P.i.and then disappeared Again it was detected at 96h P.i.only in oral infection group and maintained till 120h P.i.,but it didn’t appear at 72h P.i.in injection group.WSSV in heart.muscle was detected at 36h P i in oral infection group and 24h P.i in injection group respectively.and then increased generally.In addition,W SSV in intestine epithelium,con ective tissue,ovary of oral infection group and intestine epithelium.hypoderm,ovary of injection group could also be detected.In dead crawfish— es after l20h and 72h P i in two groups.WSSV could be detected in all the examined tissues and it demonstrated that systemic infection occurred in the animales.The tissue containing more amounts of W SSV was hypoderm in oral infection group,while intestine epithelium.gil1.hypoderm,ovary in in· jection infection group It deduced that W SSV first appears in haemolymph and then goes into hean, muscle and other tissues and proliferates in them.Once again,W SSV is released into heamolymph re— sulting in systemic infection till crawfishes’death