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2002年17卷2期

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Contents

在HSV I感染细胞中类PEBP蛋白基因的克隆及分析

王 炯, 刘龙丁, 孙明, 董承红, 王丽春, 王晶晶, 李琦涵

2002, 17(2): 97

摘要:在细胞对病毒感染后的基因反应研究中,从克隆的HSVI感染后细胞特异cDNA文库中筛选出一个705bp 克隆基因一HsP 714,基因测序分析表明为一新的全基因序列(Gene Bank Accession Number:AF372624),含有完整 的ORF框架,编码126个氨基酸;信息生物学分析结果表明该蛋白含有磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)结梅域,与 植物、哺乳动物等多物种类CEN家族产物有高度的同源性.此外该基因的进化分析结果表明此基因更接近于植物 的类CEN家族。据此推测,该基因可能是人PEBP基因家族中具有特殊意义的一个新成员。

喷昔洛韦体外抗疱疹病毒活性的研究

肖春惠, 杨占秋, 肖 红, 熊增慧, 文 利, 侯 炜, 刘 红

2002, 17(2): 102

摘要:为评价新合成的喷昔洛韦的细胞毒性和抗疱疹病毒活性,通过观察病毒感染细胞的CPE、病毒滴度、抗病毒 指数,^L而判定喷昔洛韦的抗疱疹病毒作用。结果发现喷昔洛韦对HEL细胞、Hep-2细胞的半数中毒浓度(TDso) 分别为105.2tag/mL和85.1~g/mL;对HSV一1、HSV 2、VZV、HSV—i吴株的平均半数抑制浓度(I )分别为 21,78gg/mL、20 15gg/mL、23 19.ug/mL和17 87tag/mL.对各毒株的浩疗指数分别为5 84、6 31、5.49和7 n。 故喷昔洛韦是一种有效体外抗疱疹病毒药物。
Research Article

上海部分地区戊型肝炎病毒(HEV)基因型的分析

蓝海云, 王佑春, 张华远, 彭惠利, 林京香, 辜文洁, 吴 星, 李河民

2002, 17(2): 106

为了解戊型肝炎病毒(HEY)在上海部分地区流行的基因型+采用RT nPCR的方法检验35倒急性散发性戊 型肝炎患者中HEV RNA,并对阳性产物进行克隆测序,然后对其基因型进行分析。结果显示在35例急性散发性 皮型肝炎患者中PCR阳性为9倒,测序证实8倒为HEV的基因序列;其中l倒为HEVl型,7倒为HEV 4型。提 示在上海部分地区的息性散发性戊型肝炎中以HEV 4型感染为主

辛德毕斯病毒YN87448株与宿主细胞凋亡的研究

黄文丽, 章域震, 王静杯, 张海林

2002, 17(2): 110

为了了解云南辛德毕斯病毒在BHK21细胞上的生长特性 并观察该病毒在BHK21细胞、3d龄和2周龄小 白鼠中是否有嗣亡反应出现。在接种后不同时间取样,检测病毒的滴度,电镜捡测 亡细胞,检测细胞的DNA阶 梯。一步生长曲线结果表明病毒在出现CPE之前就有大量繁殖。秋水仙索对该病毒的成熟释放没有抑制作用。 该病毒对BHK21、小白鼠均可产生细胞i崩亡。

复制缺陷型人泡沫逆转录病毒载体构建和外源基因表达

李 治, 杨 频, 刘 辉, 李文鑫

2002, 17(2): 114

在人泡沫逆转录病毒(human foamy virus.HFv) 病毒全长克隆pHRSV13的基础上,缺失病毒基因组的en 基因和6 基因,构建了一个表达标记基因 。。和报道基因gYP的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI.GFP。在与辅 助质粒pZXGp共转染情况下.得到复制映陷型的重组病毒颗粒GPSNI.GFP。该病毒颗粒可以感染多种宿主细胞, 将携带的外源基固整合于细胞染色体DNA上并实现表达。

斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltNPV)基因组EcoR I-G片段的序列分析

李 镇, 龙綮新, 袁美妗, 贺雄雷, 庞 义, 王功章

2002, 17(2): 119

摘要:斜纹夜蛾棱多角体病毒(SP1rNPV)基因组EcoR I-G片段垒长7 450hp,包括7个开放读码框:vp39、 1ef-4、 cg30、p91、v933、tlp20、AcMNPV ORF81同源基因和一个同源区(hr) 基因组排列比较分析发现,这些基因在基因 组中的排列,在所有已知序列的杆状病毒中都比较保守。

中国棉铃虫核多角体病毒基因组Xba I-I片段的序列分析

冯枞棣, 陈新文Just M.VIak, 胡志红

2002, 17(2): 125

报道丁棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)XbaI-I片段的序列结构 。该片段在基因组上定位于L8 4— 22-8 rn u,包括8十完整的开放阅读框架和p47的5 端部分序列:其中“biquitin 39K/pp31, r一11, 47, Ac34,Ac38和Lse125 honrologue 7十基因是杆状病毒的同源基因,另外两十0rJ507和0r厂1 080是HaSNPV的特 有基因,且具有典型的早期表达基因启动于的特征.经软件分析发现这两个基因推导的产物具有典型的跨膜压结 掏。序列比较分析表明, biq“iti 基因与其它杆状病毒的同源基凼有相同的保守区, 39K/pp31具有和其它杆状 病毒回源基因不同的启动子结构

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒的感染对Sf9细胞周期的影响

王 颖 .余泽华, 姚汉超, 陶德定, 陈曲侯

2002, 17(2): 132

摘要:病毒的感染导致细胞内部发生一系列变化。应用流式细胞仪FACS的荧光检测,测出Sf9细胞完成整个周 期循环大约需要I8h.G1、S、GfM 各时相的时间间隔约为6h;AcNPV 感染Sf9细胞1218h,细咆被抑制于GfM 期;SD细胞同步于G一/S期后释放细咆并用AcNPV感染,12h后.2/3的细咆处于GfM期.1/3的细胞处于S期。

文山松毛虫质型多角体病毒在Sf21细胞中离体增殖试验

马永平, 孟小林, 徐进平

2002, 17(2): 137

摘要:研究了文山松毛虫质型多角体病毒(DpCPV.W)在St21细胞中的离体增殖行为.并进行丁空斑试验.结果显 示DpCPV.W 毒株能够在Sf2i细胞中增殖.也能在Sf2i细胞上形成空斑.井能产生形态正常的病毒多角体。在 DpCPV W 中加入基因工程增效蛋白.能显著增加病毒粒子对离I奉细胞的感染率.增幅达145% 生物渤l定表明.离 体增殖的病毒多角体与虫体增殖的多角体的毒力相当。因此.Sf2i细胞可 作为文山松毛虫CPV增殖行为研究 的离体细胞系统.也可通过空斑纯化技术对文山松毛虫CPV生产防治的病毒种进行单个病毒粒子的分离纯化。

江苏水稻黑条矮缩病毒S10的cDNA克隆序列分析

王朝辉, 周益军, 范永坚, 程兆榜, 张文荟

2002, 17(2): 142

从来自江苏连云港并在本实验室保存的水稻黑条矮缩病毒接种的病株玉米中提取dsRNA.采用改进的单引 物扩增技术获得丁病毒基因组片段$10的cDNA克隆井测定了其垒序列。结果表明$10全长l 80lbp.含有一个 ORF.组织结构与日本报道的RBSDV基本一致,核苷酸和推导的氮基酸序列与MRDV的相似性分别为87 5%和 92 6%.与RBSDV 的相似性分别为93 3%和96 4%。该研究也为病毒dsRNA克隆和序列分析奠定丁基础

伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及缺失转移载体的构建

姜 焱, 侯玉峰, 陈德胜, 陈溥言P

2002, 17(2): 149

根据已发表的伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus.PRV)I’Igt和gE基因序列.设计两对引物用PCR方法扩增 出PRV—SH 和gE基因,将其克隆 pUC18载体中.获得了缺失部分基因gI的转移载体质粒,命名为pgEI

口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析

刘在新, 赵启祖, 张显升, 江鸡斐, 常惠芸, 陈应理, 李 冬, 魏怀录, 谢庆阁

2002, 17(2): 153

摘要:以日蹄疫Akesu/58分离株的53代牛舌皮病料为材料,采用RT PCR法,扩增和克隆了两个约1.5kb的DNA 片段。桉酸序列测得结果对接后,涵盖了全部P3区的基因序列。日蹄疫Akesu/58分离株基因组P3区的核酸序 列共计2,724nt,包括一个终止密码子TAA,共编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因是459nt,编码153个 氨基酸;3个3B(VPg)基因分别是69 72和72nt,氨基酸分别为23、24和24;3c是639nt,213个氨基酸;3D是 1,413nt,471个氨基酸 各蛋白间由Glu/Gly(Serl连接。序列比较显示:3A的C端易变,其它区的变易呈零星散在。

口蹄疫病毒株China/99 L区段核苷酸序列测定及比较分析

张显升, 赵启祖, 刘在新, 刘相涛, 常惠芸, 江鹏斐, 陈应理, 李 冬, 魏怀录, 谢庆阁

2002, 17(2): 158

以口蹄疫病毒株China/99 RNA为模板.反转录并扩增目的cDNA.然后与pGEM.T Easy载捧连接并转化 JM109菌株.提取的重组质粒用电泳、PCR amp~~和EwR1酶切法鉴定。该毒株与A10、O K、O1C amp。s和TW45 毒株的桉苷酸序列差异率分别为15 27% 、15.56% 、15 56% 和15 49% 氡基酸序列差异率分别为8 29%、8.76%、9.22%和l0.14%。五十毒株的L/P1连接处均为苷氨酸(Gly}/异亮氡酸(Ue)。序列比较表明.T—C、AG 和AC转换率较高.是点突变的热点核苷酸.是影响氨基酸稳定的因素之一 第43 53、95105、108.111、 146153、 161173、183·188和182187区域扳有可能是L蛋白酶的活性中心.第48位的H、5l的c、65位的E、95位的H、109 位的H、138位的H、148位的H和165位的E可能是L蛋白酶的活性位点.它们在维持蛋白质的空间掏像和功能 方面具有重要作用。

华南地区新城疫病毒HN基因的克隆及其系统发育分析

贺东生, 秦智锋, 刘福安

2002, 17(2): 163

用RT-PCR一步法扩增了华南地区NDV野毒HN基因.并对其中的3株的HN基因897bp片段进行了克 隆、测序及同源性分析。本试验还对该毒株的系统发育情况进行了分析:中国华南地区NDV各毒株与欧美国家I 至V基因型明显分离.遗传关系较远 台湾省的NDV各毒株归属为一型.并且与华南株的遗传距离较近。NDV 华南FS1株不能归娄到任何一十基因型中。广东地区从鹅群中分离到的副粘病毒GPMV株与我们从鸡体中获得 的NDV FS2株有很近的亲缘关系。

伪狂犬病病毒糖蛋白G基因的结构分析及其原核表达

闵 平, 张楚瑜, 潘兹书

2002, 17(2): 166

利用PCR技术扩增 曲狂犬病毒湖北抹(PRV liB)糖蛋白G(gG)基因.进行了序列测定和分析 结果显示 扩增和测序片段长1804bp.G+C含量68 78%。gG 基因ORF长1500bp,编码500个氪基酸组成的多酞 与PRV Rice株gG 基因比较.两者核苷酸及推导的氪基酸序列同源性分别为98% 、84 1%。320~380位之问的氮基酸序 列存在较大差异。根据序列分析结果.选取gG基因长短不同的两个片段分别克隆到原棱表达载津口ET28a(+)进 行表达。经SDS PAGE和Dot—ELISA分析证实 表达出分子量大小分别约为551.1)和63kD的特异性gG 多酞,这 为深入阐明PRV gG基因结构与功能及研制gG-ELISA诊断试剂盒奠定丁基础。

鸡传染性支气管炎病毒两个地方分离株s1基因的扩增 克隆与序列分析

戴亚斌, 陈德胜, 潘杰彦, 姜焱, 刘兴友, 芦银华, 刘 梅, 丁 铲, 陈溥言, 蔡宝祥

2002, 17(2): 172

对IBV肾型毒株JS/95/03和呼吸型毒株SD/97/01的s1全基困进行了扩增、克隆和序列测定.将两毒株的 sl基因序列与l0个参考毒株进行了比较。结果表明,1s/95/03和SD/97/01分剐与M41和H120株亲缘美幕最 近,它们可能是疫苗毒株的变异株。JS/95/03和SD/97/01问的亲缘关系也较近,两者s1蛋白中只有24个氨基酸 的差异,其中有15个位于前130个氯基酸中。第116位氪基酸可能与毒株的致病性有关 对两毒株s1蛋白的二级 结构进行了预测和比较,结果发现,一个或极少数氨基酸的差异即可导致s1蛋自二级结构和抗原性的改变。

四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究

2002, 17(2): 178

本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRV873 、GCRV875、GCRV876与新分离的GCRV991毒株进行了细胞培养与病毒感染特性等比较研究。结果表明 ,GCRV873 、GCRV875、GCRV876在 - 30℃保存 10年后仍然具有一定的感染性 ,其滴度均在 10 2 TCID50 /mL以上 ,略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价。经传代培养后 ,四株GCRV的毒力逐渐升高 ,并趋于稳定 ;当感染复数 (MOI)为 0 .0 5PFU/cell时 ,测定四株GCRV的滴度均高于 10 8TCID50 /mL ,但略有差异。GCRV873 的滴度最高 ,可达到 6 .4× 10 11TCID50 /mL。连续传代的GCRV毒株在不同温度 (2 8℃、31℃、34℃、37℃、41℃ )条件下 ,均可感染CIK细胞 ;在 2 8℃时 ,感染效价最高 ,随着温度的升高 ,其感染效价逐渐降低。

四株草鱼呼肠孤病毒毒株的细胞感染特性比较研究

方勤, 肖调义, 邹桂平, 章怀云, 汪亚平

2002, 17(2): 182

摘要:本文首次对低温保存的三株草鱼呼肠孤病毒GCRvm、GCRvm、C-CRV 与新分离的GCRv t毒株进行了 细咆培养与病毒感染特性等比较研究。结果表明,GCRV州、GCRV日7 GCRVs76在一30’(2保存l0年后仍然具有一 定的感染性,其滴度均在10 TCID50/mL以上.略低于从病鱼组织分离的GCRV991毒株的滴价。经传代培养后,四 株GCRV的毒力逐渐升高.并趋于稳定;当感染复数(MOI)为0 05PFu/cell时,测定四株GCRV的滴度均高于l0 TCID~/mL 但略有差异。GCRVs73的滴度品高,可达到6.4×10“1℃I n/mL。连续传代的GCRV毒株在不阿温 度(28"(2、31’(2、34"12;、3TC、4112)务件下 均可感染CIK鲴咆;在Z8"C时,感染效价最高,随着温度的升高.其感染效 价逐渐降低。

河蟹颤抖病病毒的分离纯化及其动物致病性试验

孙学强, 陆承平

2002, 17(2): 185

特人工复制发病的河蟹(中华绒赘蟹)组织匀浆,离心上清经聚乙二醇(PEG 6 000)沉淀,再经分子筛层析.分部收集分别测定256-300am的吸光值。各收集峰嗣PEG20000,于4℃浓缩.制作负染标本经透射电镜观察,发现在第一峰浓缩液中存在大量球状病毒颗粒 大小5O 100 。用纯化的病毒进行动物致病性试验,接种石蟹(锯齿华溪蟹)发生“颤抖病”,并用ELISA双抗体夹心法进行检测,显示感染石蟹较对照石蟹有明显差异。
Brief Reports

人巨细胞病毒PP71基因序列分析与表达

张裕平, 陈绳亮, 陈立群, 李天宪

2002, 17(2): 189

Abstract:PP7I gene Of the Hut~tan cytomegalor virur(HCMV AD一169)strain W,qS amplified by PCR. After digestion by Barn H I and Hin dⅢ.the fragment was cloned into the high level expre~ion vec— tot pET28a Recombinant plasmid pET28a—PP71 was transfonned into E.coli BI 2l(DE3)and ln— duced by IPTG,high 1evel protein V,’as produced,and the target protein WaS 40% of all proteins.Purifl— eatlo~ recovery rate was high and up to 92 4% of the target protein before purification.which provides scientific basis on research of HCM V pathogenesis and diagnosis.

金刚烷胺、病毒唑和鱼腥草三者联用时的协同抗流感病毒作用

严银芳, 陈晓, 杨小清, 吴少华, 方冬芬, 董长垣

2002, 17(2): 192

The research Of the cooperative antivirus activities was carried OUt using anaantadine. rib— avirin and herhy houttuynia.The inhibitory effect 0f CPE caused by influenza virus A3 in MDCK cd and the therapeutic effect on BALB/c mice pneumonia caused by influenza virus FM1 were examined and analyzed when amantadine,ribavirin and herby houttuynia were used alone or assoeiatively The results show that the concentrations Of amantadine,ribavirin and herby houttuynia with sanle effeet were 256,512 and 1024 times cooperatively as many as alone in vitro,respectively.The ablities of treating pneumonia of mice when three kinds of drugs were used coperatively were far higher than those alone in BAI B/c mice