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2010年25卷3期

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Review

核仁与病毒感染

王雷, 任晓明, 邢俊吉, 郑春福

2010, 25(3): 151 doi: 10.1007/s12250-010-3093-5

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核仁是真核生物的一个亚核结构,以前人们一直认为它只与rRNA的合成、加工有关,然而近年来越来越多的证据表明,核仁还有很多其他功能,如处理tRNA前体,作为压力反应感受器,并且与基因沉默,细胞衰老及周期调节有关。本文概括地介绍近期对于核仁功能的认识,调节蛋白的核仁定位,以及核仁在病毒感染时的一些作用,其中包括本实验室在I型单纯疱疹病毒的US11,UL24基因和I型牛疱疹病毒的感染细胞蛋白27(BICP27)方面相关研究工作。

Research Article

Ⅰ型单纯疱疹病毒立即早期蛋白ICP22的细胞定位分析

寸韡, 陈婕, 张莹, 刘龙丁, 李琦涵

2010, 25(3): 158 doi: 10.1007/s12250-010-3118-0

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核蛋白通常以点状结构存在,但是这个过程的具体机制还不清楚。在我们的早期研究中发现,HSV-1的立即早期蛋白感染性细胞蛋白ICP22通过ICP22-EGFP融合蛋白定位于核内。结果表明,ICP22-EGFP在高表达的情况下,逐渐聚集在核内并持续整个细胞周期,甚至在细胞分裂期也不解聚,最终分布于子细胞中。随后我们建立了含有四环素依赖的转录调控元件的哺乳细胞表达系统。因此,ICP22-EGFP在核内的定位情况可以根据不同的诱导条件来控制。这就提示了ICP22的定位除了受它的结构影响外,还受启动子的调控。我们的发现为研究病毒的转录调控基因提供了新线索。另外,我们建立的非蛋白酶报告系统可以被用来评价核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)在转录调控中的作用。

利用重组ORF73蛋白检测卡波氏肉瘤相关疱疹病毒酶联免疫方法的建立

欧阳新星, 付碧石, 李宝林, 曾妍, 徐帆洪, 王林定

2010, 25(3): 168 doi: 10.1007/s12250-010-3106-4

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为了纯化卡波氏肉瘤相关疱疹病毒编码的潜伏期蛋白ORF73并分析其免疫原性,我们在原核表达体系中表达了卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码的羧基端orf73基因产品。含重组质粒pQE-80L-orf73的大肠杆菌经由异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达。融合蛋白通过亲和层析纯化。表达的蛋白和纯化的产品经由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。我们建立了一种ELISA方法来鉴定纯化的ORF73的免疫原性。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示纯化的ORF73蛋白约为27 kDa, 与预期一致。ELISA分析证明ORF73具有免疫原性.初步实验证明ORF73检测 KSHV的敏感性为100%,特异性为100%。利用建立的ORF73 ELISA来比较湖北汉族和新疆汉族KSHV的感染率,发现新疆汉族KSHV的感染率显著比湖北汉族的感染率高(6.7% vs 2.9%, P=0.005)。

汉坦病毒核酸疫苗在小鼠体内表达动力学研究

王斯, 聂清, 郑兰艳, 胡军, 罗恩杰

2010, 25(3): 177 doi: 10.1007/s12250-010-3103-7

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在此项研究中,我们构建了含有绿色荧光蛋白的汉坦病毒核酸疫苗pEGFP/S,肌肉小鼠后通过检查发现了该疫苗及其所产生抗体在小鼠体内几个主要脏器可以至少存在60天。我们的研究发现汉坦病毒核酸疫苗在小鼠体内脏器的持续存在有助于不断刺激机体产生抗体,起到类似于免疫增强剂的作用。

甜菜夜蛾核型多角体病毒极早期基因蛋白 1(IE1)在哺乳动物细胞中的定位和功能分析

梅小伟, 姚立, 张忠信

2010, 25(3): 183 doi: 10.1007/s12250-010-3113-5

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本文报道甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV) ie1 基因在哺乳动物细胞中的功能,这是首次对杆状病毒Ⅱ组核型多角体病毒的IE1功能进行研究。我们从病毒基因组扩增SeMNPV ie1,将其连接到能表达GFP蛋白的pEGFP-C1载体上,转化哺乳动物细胞HEK 293进行瞬时表达。激光共聚焦观察结果显示,IE1-GFP 融合蛋白定位在哺乳动物细胞的细胞核中。SeMNPV ie1 分别与AcMNPV gp64、SeMNPV F 蛋白和果蝇 hsp70 启动子序列连接在哺乳动物细胞中表达,结果表明,在缺少hr的条件下,SeMNPV IE1 明显促进F蛋白启动子的作用,但对gp64 启动子的作用没有显著影响。SeMNPV IE1对 hsp70启动子也有促进作用。这些结果显示,SeMNPV是Ⅱ组NPV成员,尽管SeMNPV ie1与Ⅰ组或Ⅱ组NPV的ie1s在基因序列上都有很大差别,但它在异源的哺乳动物细胞中仍具有核定位和反式活化功能。

猪圆环病毒2型 部分ORF2蛋白可溶性表达及间接ELISA方法的建立

尹双辉, 杨顺利, 田宏, 吴锦艳, 尚佑军, 才学鹏, 刘湘涛

2010, 25(3): 191 doi: 10.1007/s12250-010-3085-5

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仔猪断奶后多系统衰竭综合症(PMWS)是猪的重要病毒性传染病,研究表明,猪圆环病毒2型(PCV2)与PMWS发生有密切地关系。PCV2编码地衣壳蛋白是主要结构蛋白,因其至少含有3个与免疫学反应相关的抗原结构域,所以是建立检测PCV2感染抗体的首选抗原。本研究中,以大肠杆菌表达地可溶性截短的ORF2蛋白作为抗原,建立了用于检测PCV2感染抗体的间接酶联免疫吸附试验方法(TcELISA),其敏感性、特异性和准确率分别达到88.6%, 90.7% 和89.4%。利用TcELISA和间接免疫荧光(IIFA)对113份田间血清样品进行检测,两者符合率达到89.38%。特异性试验表明,重组的ORF2抗原与猪的相关病毒病阳性血清不存在交叉反应。所以,TcELISA 是可靠地检测PCV2抗体的方法,可应用在大规模的PCV2感染抗体的检测和评价PCV2疫苗的试验工作中。

Ⅰ型单纯疱疹病毒ICP27蛋白的表达、纯化及其特异性抗血清的制备

赵磊, 丁琼, 郭洪

2010, 25(3): 199 doi: 10.1007/s12250-010-3116-2

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Ⅰ型单纯疱疹病毒可引起唇疱疹以及皮肤粘膜疾病。细胞感染蛋白27(ICP27)是立即早期调节性磷酸化蛋白,该蛋白的同源蛋白在目前所知的所有疱疹病毒型中高度保守。将ICP27基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌中表达ICP27蛋白,通过镍离子亲和层析柱纯化该蛋白,然后将该纯化蛋白免疫新西兰大耳白兔制备抗血清。Western blot结果显示,该抗血清可以识别纯化的重组ICP27蛋白。免疫荧光实验(IFA)结果显示,该抗血清可以高度特异的检测到HSV-1感染细胞中ICP27蛋白的表达。因此,该抗血清对于研究HSV-1感染中的ICP27蛋白的生物学功能具有重要的意义。

逆转录病毒介导的猪水泡病主要抗原蛋白基因vp1的表达及其豚鼠免疫活性分析

田 宏, 吴锦艳, 尚佑军, 尹双辉, 郑海学, 刘湘涛

2010, 25(3): 206 doi: 10.1007/s12250-010-3100-x

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猪水泡病VP1蛋白是猪水泡病病毒的主要抗原蛋白,,本研究通过逆转录病毒表达系统将猪水泡病的VP1蛋白在PK15细胞中得到了表达,并通过豚鼠免疫试验对表达的VP1蛋白活性进行了分析。结果显示,表达VP1蛋白可被猪水泡病阳性血清所识别,并且可在豚鼠体内产生特异的抗SVDV抗体,并有强的淋巴细胞增殖反应。这一系列的结果表明,逆转录病毒介导表达的猪水泡病VP1蛋白可诱导出很高的特异性抗体,因此具有良好的开发和应用前景。

猪传染性胃肠炎病毒全基因的克隆及其基因3’端在不同细胞传代的特征

李建强, 程杰, 兰喜, 李学瑞, 李薇, 殷相平, 李宝玉,

2010, 25(3): 213 doi: 10.1007/s12250-010-3108-2

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对分离自甘肃的猪传染性胃肠炎病毒TS株进行了全基因的克隆并和其他毒株进行序列比较。核苷酸和氨基酸进化树显示TGEV可分为3个群,TGEV TS株与美国Miller群有较近的亲缘关系,而其5’非编码区却与Purdue群有较高的同源性。在不同细胞连续传代50代后发现,TS株在PK-15细胞上传代可能会被致弱,而IBRS细胞不适合TS株的培养。