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2010年25卷5期

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Review

HIV包膜糖蛋白诱导T淋巴细胞凋亡的机制

万志涛, 陈绪林

2010, 25(5): 307 doi: 10.1007/s12250-010-3148-7

[HTML全文] [PDF 373 KB] Springerlink

感染HIV会导致CD4 T淋巴细胞水平的持续下降,引起免疫系统的功能障碍,并最终发展成为艾滋病。在HIV感染过程中造成T细胞丢失的机制比较复杂,被感染细胞以及旁观细胞的凋亡可能在这一过程当中发挥主导作用。HIV的包膜糖蛋白可以通过死亡受体介导的凋亡途径以及线粒体途径诱导细胞凋亡。本文对HIV包膜糖蛋白诱导T淋巴细胞凋亡的机制进行了综述。

Research Article

单基因组扩增法分析人类免疫缺陷病毒感染者体内印地那韦耐药进化

耿庆茂, 李韩平, 鲍作义, 刘永健, 庄道民, 李林, 刘思扬, 李敬云

2010, 25(5): 316 doi: 10.1007/s12250-010-3122-4

[HTML全文] [PDF 581 KB] Springerlink

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus Type 1,HIV-1)在感染者体内以准种形式存在,其基因组具有多样性的特征。抗病毒治疗过程中,病毒耐药性的产生和发展是有效抗病毒治疗的主要障碍。分析HIV-1在体内的分子进化路径是研究耐药机制的基础,并且可以减少耐药的发生和传播。利用单基因组扩增法(Single-Genome Amplification,SGA)分析一名长期服用逆转录酶抑制剂并且将奈韦拉平(Nevirapine,NVP)改为茚地那韦(Indinavir,IDV)的患者体内IDV耐药产生及发展情况。通过对患者(XLF)连续随访,采集包括服用IDV之前的1次本底和服用之后的5次系列样本(XLF1至XLF6)。利用单基因组扩增法得到病毒的聚合酶区准种序列。所有的序列均提交斯坦福耐药数据库,得到耐药信息。从6份系列样本中共得到了149条蛋白酶全长和171条逆转录酶全长序列,所有的序列均为B亚型。在患者服用IDV之前,患者体内病毒在蛋白酶区只含有一些多态性位点。服用IDV之后,蛋白酶区只含多态性位点的病毒比例下降,而含有次级突变位点G73S的病毒开始上升,并成为优势毒株。随着治疗时间的延长,G73S与M46I/L90M组成一个连锁的耐药突变模式——M46I/G73S/L90M,并逐渐取代G73S成为优势毒株。在第6次随访样本中,97.9%的病毒含有M46I/G73S/L90M突变模式。因为一直服用逆转录酶抑制剂,患者体内存在高比例的高度逆转录酶抑制剂耐药性病毒株,并且没有随着IDV耐药株的出现和发展产生太大的变化。利用SGA的方法确定了一种相对稀有的IDV耐药突变模式,即在G73S的基础上加入M46I/L90M形成M46I/G73S/L90M。

甲型H1N1流感同义密码子偏性分析

李臻鹏, 应德全, 李鹏, 李非, 伯晓晨, 王升启

2010, 25(5): 329 doi: 10.1007/s12250-010-3123-3

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甲型H1N1病毒正在全球迅速蔓延.有文献报道:在进化上,甲型H1N1流感基因组中既有人流感病毒的基因片段,又有猪和禽流感病毒的基因片段.我们研究了导致甲型H1N1流感密码子偏性形成的原因,并对基于密码子偏性对60株甲型流感病毒进行了聚类分析.结果表明大多数甲型H1N1流感的最优密码子以A和U结尾, 并且甲型H1N1流感密码子偏性较低.碱基组成的限制、双核苷酸的偏性和翻译选择是甲型H1N1流感密码子偏性形成的主要原因.在基因组水平上,甲型H1N1流感和以猪为宿主的H1N1(A/swine/Kansas/77778/2007(H1N1))、来自北美的H9N2、来自来亚洲和北美的H1N2和来自北美的H3N2有着较为接近的密码子偏性.密码子偏性的研究结果可以为理解驱动甲型H1N1流感进化的过程、甲型H1N1流感基因表达的调控及其进化提供有价值的信息.

龙须菜硫酸酯多糖组分的体外抗流感病毒活性

陈美珍, 谢好贵, 杨拉维, 廖灶辉, 余杰

2010, 25(5): 341 doi: 10.1007/s12250-010-3137-x

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本文对龙须菜硫酸酯多糖组分体外抗流感病毒的活性进行了研究。用MTT比色法研究了PGL, GL-1,GL-2和 GL-3 对MDCK的细胞毒性及其抗病毒活性,用细胞病变(CPE)法观察其对由流感病毒H1-364引起的CPE的抑制作用。此外,还用蚀斑计数(PFU)法,MTT法及CPE法探讨了PGL抗病毒机制。结果表明:1)龙须菜硫酸酯多糖对MDCK 细胞的毒性较低,能明显抑制由H1-364引起的CPE。2)抗病毒活性与多糖组分中硫酸基团的含量有关,含量约13%时,多糖(PGL和GL - 2)的抗病毒活性最好。3)PGL是通过干扰H1-364对宿主细胞的吸附并抑制其复制而发挥其抗流感病毒作用。总之,本文揭示了龙须菜硫酸酯多糖具有较强的抗流感病毒H1-364活性,适量的硫酸基与多糖的抗病毒效果密切相关。

Development of a Polyclonal Antibody-based AC-ELISA and Its Comparison with PCR for Diagnosis of Canine Parvovirus Infection

Manoj Kumar, Sukdeb Nandi, Sunil Chidri

2010, 25(5): 352 doi: 10.1007/s12250-010-3132-x

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A polyclonal antibody-based antigen-capture ELISA (AC-ELISA) has been developed for detection of Canine parvovirus (CPV) antigens in faecal samples of dogs. The assay uses rabbit anti-CPV polyclonal antibody as the capture antibody, guinea pig anti-CPV polyclonal antibody as tracing antibody and anti-guinea pig HRPO conjugate as the detection system. The optimum dilution of the capture antibody and the tracing antibody capable of detecting the CPV-2 antigens was found to be 1:1 600 and 1:400, respectively, in the check-board titration. In this study, a total of 152 samples (129 faecal samples and 23 cell culture supernatant) were tested both by AC-ELISA and by polymerase chain reaction (PCR). Of the samples tested, 69 and 78 samples were found positive by AC-ELISA and PCR, respectively. The AC-ELISA had relative sensitivity, relative specificity and accuracy of 88.4%, 100.0% and 91.4% respectively. The analytical sensitivity of AC-ELISA was estimated to be 102.8 TCID50/mL whereas PCR sensitivity was 100.8 TCID50/mL. The AC-ELISA is a simple, quick and reliable method for screening large numbers of faecal samples of dogs suspected of CPV infection.

稳定诱导表达SARS-CoV核衣壳蛋白真核细胞系的建立

常国辉, Andrew Dividson, 林磊, Matt Wilson, Stuart G Siddel, 祝庆余

2010, 25(5): 361 doi: 10.1007/s12250-010-3124-2

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为了建立可稳定诱导表达SARS-CoV核衣壳蛋白的真核细胞系。以含有SARS-CoV HKU-39449核衣壳蛋白基因的质粒p8S为摸板,利用密码子优化和PCR、克隆等手段构建重组质粒pTRE-Tight-SARS-N,通过共转染和Western Blot等方法建立并鉴定单克隆细胞系。限制性内切酶酶切消化和序列测定等鉴定结果表明,构建的pTRE-Tight-SARS-N 重组质粒含有密码子成功优化的SARS-CoV核衣壳蛋白基因。嘌呤霉素的筛选结果表明,通过重组质粒与筛选线形质粒pPUR共转染BHK-21 TET-ON细胞,获得了大量的阳性细胞克隆。SDS-PAGE蛋白电泳和Western Blot杂交图谱显示,诱导剂强力霉素可严格调控SARS-CoV核衣壳蛋白表达的开启及其蛋白的表达量。通过该研究建立了一系列可通过强力霉素定量诱导而稳定表达SARS-CoV核衣壳蛋白的细胞系,该结果的取得为体外拯救SARS-CoV和进一步开展其反向遗传学研究奠定了基础。

CXCL16与SARS-CoV N蛋白在细胞内外相互作用的研究

张元鹏, 张荣武, 常维山, 王艳艳

2010, 25(5): 369 doi: 10.1007/s12250-010-3129-x

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为了研究宿主细胞内SARS-CoVN蛋白的相互作用蛋白,探索功能联系。构建真核表达载体pEGFP-N1/SARS-COVN、pdsRed2-N1/CXCL16并用磷酸钙法共转染293FT细胞,构建和纯化了带HIS标签的SARS-COVN-GFP融合蛋白并用于体外结合实验。激光共聚焦检测显示SARS-CoVN与CXCL16在293FT细胞的胞浆共定位,提示其相互作用可能是直接结合。荧光显微镜观察到纯化的SARS-COVN-GFP融合蛋白在细胞外可与表达在的细胞膜重组CXCL16结合上,说明二者能相互结合。

余甘子多酚1, 2, 4, 6-四-没食子酰基-β-D –葡萄糖对HepG2.2.15细胞中HBsAg与HBeAg分泌的影响

向阳飞, 鞠怀强, 李深, 张颖君, 杨崇仁, 王一飞

2010, 25(5): 375 doi: 10.1007/s12250-010-3144-y

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从中药余甘子(Phyllanthus emblica L.)中提取出多酚类化合物1, 2, 4, 6-四-没食子酰基-β-D –葡萄糖(1246TGG)并初步评价其抗乙型肝炎病毒(HBV)活性。细胞病变效应法(CPE)观察1246TGG对HepG2.2.25与HepG2细胞的毒性,酶联免疫吸附测定检测药物处理后HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的分泌水平。结果表明HepG2.2.15细胞在无毒浓度的1246TGG(6.25 μg/mL、3.13 μg/mL)处理时HBsAg与HBeAg的分泌受到抑制,但随着检测时间的延长,抑制作用逐渐减弱。本研究为进一步评价1246TGG抗HBV活性及其作用机制提供了理论依据。