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2012年27卷3期

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Review

流感亚单位疫苗和VLP疫苗的研究进展

邓马平, 胡志红, 王华林, 邓菲

2012, 27(3): 145 doi: 10.1007/s12250-012-3241-1

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流感病毒给人类造成严重的全球性威胁,其反复不断的出现所引起的疾病每年都会导致成千上万人的死亡,给社会带来巨大的经济损失,因此采用一种安全、高效、经济的方式生产流感疫苗是极其重要的。亚单位疫苗和VLP疫苗通过利用目前先进的DNA重组和表达纯化技术,提供了这样一种理想的疫苗生产方式。本综述概述了基于重组表达流感病毒血凝素蛋白(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白2(M2)和核衣壳蛋白(NP)的流感亚单位疫苗和VLP疫苗的最新研究进展,深入了我们对当前流感疫苗研制的了解,并为设计和发展新型人流感疫苗提供了一定的参考价值。

Research Article

樱桃谷鸭鸭圆环病毒的全基因序列分析

张兴晓, 刘少宁, 孔义波, 谢之景, 姜世金

2012, 27(3): 154 doi: 10.1007/s12250-012-3214-4

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为了解国内DuCV的分子流行病学情况,对2007-2008年间分离自樱桃谷鸭的6株DuCV进行了全基因组测序,同时选取了分离自Mulard duck, Muscovy duck, Pekin ducks and Mule duck的 27株DuCV与这6株DuCV进行了序列与系统进化分析比较。结果表明,6个分离株具有DuCV属的共同特征:有一个颈环结构;三个主要开放阅读框(Rep基因,Cap基因和ORF3基因);四个重复序列;保守序列滚环复制且dNTP结合区域位于Rep蛋白区域;对这些病毒Cap基因的核苷酸序列进行系统进化分析表明,DuCV可分为两个基因型:基因全长为1988和1989的DuCV分离株处于基因A型中,基因全长为1991,1992,1995和1996的分离株则处于基因B型中,而从樱桃谷鸭中所分离的6株DuCV则分别归于2个基因型。本研究结果显示了樱桃谷鸭DuCV的多样性。

感染HIV-1的长期不进展患者和典型进展患者的血浆中和活性相似

王铮, 李天一, 李敬云, 陈立力, 刘永健, 李韩平, 鲍作义, 王晓林, 庄道民, 刘思扬, 李林

2012, 27(3): 165 doi: 10.1007/s12250-012-3239-8

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中和抗体被认为是一个重要的用于HIV-1疫苗评估的保护性参数,但是,在HIV-1感染人群中,中和抗体控制病情进展的确切作用尚不明了。比较长期不进展与典型进展患者血浆中的中和抗体对B、C族群假病毒的保护性功能。我们发现两者的中和活性不存在差异性,与最新报告相符。另外,HIV-1感染者CD4+数量和病毒载量与中和抗体的滴度及广谱性没有相关性。因此,我们考虑应从新的视角探索中和抗体对HIV-1患者发病进程的保护性作用。

抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备及鉴定

王文娟, 李雄, 王力华, 单虎, 曹蕾, 于鹏程, 申辛欣, Simon Rayner

2012, 27(3): 172 doi: 10.1007/s12250-012-3242-0

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制备抗狂犬病病毒单克隆抗体,为研发快速特异的狂犬病病毒诊断方法奠定基础。以狂犬病病毒核蛋白、狂犬病病毒人用疫苗株(PV株)为免疫原免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按常规方法进行融合;利用间接免疫荧光法筛选所获单抗细胞株;将获得特异稳定分泌抗狂犬病病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株经小鼠腹腔注射制备单抗腹水;对所得单抗进行了亚类及特异性和敏感性的系统鉴定。获得2株(3B12和4A12)特异稳定分泌抗狂犬病病毒单抗细胞株,其腹水效价分别为1:8000和1:10000,分泌单抗为抗狂犬病病毒IgG2a亚类。所得两株单抗细胞株能高效价稳定特异分泌抗狂犬病病毒单抗,且具有良好的稳定性和特异性,适宜应用于下一步狂犬病检测试剂的研发。

应用三重RT-PCR酶联杂交方法同时检测三种虫媒病毒

董丹, 付士红, 王力华, 吕志, 李太元, 梁国栋

2012, 27(3): 179 doi: 10.1007/s12250-012-3246-9

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虫媒病毒给世界各国的农业和公共卫生带来严重威胁。快速准确鉴定病原对于虫媒病毒病的流行病学监测和实验室调查将起到重要作用。基于这种原因,我们建立了一种成本低廉、高效快速和检测敏感性高的一步三重RT-PCR联合酶联杂交法。应用该方法在一步RT-PCR反应体系中加入三对引物分别扩增三种目的序列,可实现同时检测黄病毒科乙脑病毒,披膜病毒科盖塔病毒和布尼亚病毒科塔希那病毒的目的。对于三种虫媒病毒检测敏感性分别为1 PFU/mL乙脑病毒,10 PFU/mL盖塔病毒和10 PFU/mL塔希那病毒。相对于传统血清学检测和单重RT-PCR法,具有显著的操作便捷和成本低廉的优势。通过检测29份经普通RT-PCR方法检测为乙脑阳性的脑脊液标本,所有标本表现出乙脑强阳性和盖塔病毒及塔希那病毒同时阴性结果,显示出本文所建立的一步三重RT-PCR联合酶联杂交方法具有良好的敏感性,特异性和临床适应性。

不同血清标准品用于RFFIT实验的比较

于鹏程, Akira Noguchi, Satoshi Inoue, Simon Rayner, 唐青, 梁国栋

2012, 27(3): 187 doi: 10.1007/s12250-012-3247-8

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比较RFFIT 在NIID 和CCDC两个实验室检测方法的差异以及所用血清参考品对检测结果的影响。在RFFIT试验中,同时使用两个实验室的检测方法,比较不同实验室RFFIT方法存在的差异;在同一次RFFIT试验中以NIID血清参照品和WHO 血清标准品为参照,平行检测C1、S1、S2和S4共4份血清样品的滴度;比较两个实验不同操作人员间所得结果的差异以及由两种不同标准品所得检测结果之间所存在的差异。RFFIT检测方法以及两个实验室不同操作人员的检测结果进行比较均没有显著性差异;以NIID 标准品和WHO 标准品为参照所测得的滴度比较有显著性差异,且以NIID标准品为参照所测得样品滴度值均高于以WHO 标准品为参照所测得的样品滴度值。两实验室的RFFIT操作方法具有良好的一致性,不同血清标准品用于RFFIT检测差异较大。

2007-2011年中国狂犬病新发和再发省区病毒G基因分子特征

郎树林, 陶晓燕, 郭振洋, 唐青, 李浩, 尹翠萍, Simon Rayner, 梁国栋

2012, 27(3): 194 doi: 10.1007/s12250-012-3248-7

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近年来(2007-2011年)虽然在全国疫情下降的同时,在一些既往狂犬病已经没有流行或低流行的地区出现了狂犬病新发和再发的情况。对近5年来狂犬病新疫区或疫情上升地区的狂犬病标本以及传统中高发省区(近5年疫情下降)的标本进行病毒G基因测定,并引用GenBank公开序列进行同源性、功能位点比较和种系发生等分析。2007-2011年中国5个狂犬病新发省区和6个再发省区中有5个省区得到犬、牛或人狂犬病阳性标本共9份,还有8个传统中高发省区的34份犬或人标本均测得病毒G基因全序。43份标本G基因核苷酸序列同源性为87%-100% ,推导氨基酸序列同源性为93.7%-100%。通过引用中国具有代表性的流行株G基因序列构建的种系发生树显示:43病毒标本分属于I群和II群,新发再发省区标本均属于I群,且主要集中于IA亚群;宁夏、山西和内蒙古2011年的病毒标本均与当地早些时间分离到的流行株差异较大,而是与河北、北京及天津的流行株亲缘关系较近;上海标本与当地上世纪90年代的流行株属同一分支;陕西标本则与地理位置相邻的四川流行株构成共同循环圈。结果显示:近5年中国狂犬病新发和再发省区疫情的流行可能与邻近疫情较重省区病毒的传播扩散有关。

中国云南1株狂犬病街毒株全基因组测序分析*

张建, 张海林, 陶晓燕, 唐青, 姜秀云, 梁国栋,

2012, 27(3): 204 doi: 10.1007/s12250-012-3251-z

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近年来云南省狂犬病疫情迅速上升和扩散,为深入分析和了解狂犬病在云南迅速扩散和上升的病原学因素,本研究对云南一株狂犬病病毒CYN1009D进行了全基因组的测定,并引用GenBank收录的序列进行各基因及其编码蛋白以及种系发生等分析。CYN1009D基因组全长11923nt,为基因Ⅰ型。CYN1009D各个结构蛋白基因及其编码蛋白的长度均保守,所编码蛋白的氨基酸序列与国内毒株相比较:NP的各抗原位点保守,但375位次要磷酸化位点发生变异;PP的63-64、162位磷酸化位点发生变异;MP中对病毒的合成和出芽及病毒的形态起重要作用的位点保守;GP有Asn37和Asn319两个糖基化位点,GP的中和性抗原位点保守;LP的起始氨基酸与国内大多数毒株的MM不同点为ML;基因间隔区中G-L间隔区变异较大。种系发生树分析发现CYN1009D与东南亚毒株显示更近的亲缘关系,提示我们控制本土狂犬病的同时还需要加强边境地区狂犬病的预防和控制。

BRIEF REPORT

Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Associated with Acute Pancreatitis

Edmond Puca, Arben Pilaca, Pellumb Pipero, Dhimiter Kraja, Entela Y Puca

2012, 27(3): 214 doi: 10.1007/s12250-012-3231-3

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Hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) is a systemic infectious disease caused by Hantaviruses and characterized by fevers, bleeding tendencies, gastrointestinal symptoms and renal failure. It encompasses a broad spectrum of clinical presentations, ranging from unapparent or mild illnesses to fulminant hemorrhagic processes. Among the various complications of HFRS, acute pancreatitis is a rare find. In this report, based on clinical data, laboratory and radiologic examination findings, we describe a clinical case, with HFRS from Dobrava virus, associated with acute pancreatitis. The patient was successfully treated by supportive management. Clinicians should be alert to the possibility of HFRS when examining patients with epidemiological data and symptoms of acute pancreatitis.