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2018年33卷2期

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cGAS的调控机制

熊梅光, 王素云, 王延轶, 冉勇

2018, 33(2): 117 doi: 10.1007/s12250-018-0005-6

[HTML全文] [PDF 702 KB] Springerlink
cGAS-MITA信号通路能够识别胞质中的DNA, 介导天然免疫应答,在抵抗生活周期中包含DNA的病原微生物的入侵中发挥关键作用。在某些病理条件下,如病毒诱导的细胞死亡、DNA损伤、线粒体损伤、基因突变等,导致宿主自身的DNA在胞质中异常积累。cGAS-MITA信号通路也能识别这些异常积累的DNA,并诱发自身免疫性疾病。cGAS-MITA信号通路在MITA水平的调控已经被广泛和深入地研究,并在其它文章中进行综述。本文中,我们将总结近期关于cGAS调控机制的研究进展,并展望cGAS调控机制的未来研究方向。

寨卡病毒动物感染模型的最新进展

董澍芃, 梁启明

2018, 33(2): 125 doi: 10.1007/s12250-018-0007-4

[HTML全文] [PDF 459 KB] Springerlink
寨卡病毒属于由蚊子传播的黄病毒,2015年在南美洲爆发,并由继续扩展到北美洲以及全世界的趋势。寨卡病毒在1947年首次被发现,直到2007年只有14个人类被感染的报告。该病毒感染以前只引起类似于流感的症状。但是近期的寨卡病毒感染被联系到小头病等神经及发育性疾病。因此研究人员通过建立不同的动物感染模型来研究寨卡病毒的传播和致病,以及对潜在治疗疗效的评价。此综述主要讨论寨卡病毒的动物感染模型。

广东地区猪δ冠状病毒的分离鉴定及致病性分析

徐志超, 钟惠玲, 周庆丰, 杜云平, 陈丽, 张芸, 薛春宜, 曹永长

2018, 33(2): 131 doi: 10.1007/s12250-018-0003-8

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猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新出现的一种猪肠道冠状病毒。感染PDCoV的新生仔猪出现腹泻、脱水、呕吐症状,病死率高,严重危害我国养猪业的发展,也对全球养猪业造成巨大经济损失。PDCoV自2012年第一次在香港被检测到,随后在美国、韩国、泰国、越南、老挝、中国内地如江西、湖南也相继有报道。本研究利用LLC-PK细胞从广东地区某猪场严重腹泻仔猪内容物中分离到一株PDCoV毒株,命名为CHN-GD-2016。分离毒株可以被PDCoV特异性抗血清识别,而且通过透射电镜可以观察到明显“皇冠”样病毒粒子。接着对分离到的PDCoV毒株进行全基因组序列测定、遗传进化分析,结果显示该毒株与中国大陆大多数毒株在同一分支,而且与CHN/Tianjin/2016毒株亲缘关系最近。进一步将分离的毒株与GenBank上参考毒株进行同源性比较,结果发现CHN-GD-2016毒株与其他毒株具有很高的核苷酸相似性,达97.2%-99.5%;其中与CHN/Tianjin/2016毒株核苷酸相似性最高,达99.5%。此外,对CHN-GD-2016毒株S基因进行分析,发现该毒株S基因与中国大陆大多数分离毒株一样存在3个核苷酸缺失。以上结果说明,CNH-GD-2016毒株与中国大陆其他PDCoV毒株可能具有相同的来源。最后用10 mL病毒滴度为1×104 TCID50/mL病毒液口服感染新生仔猪,相较于对照组,攻毒组出现明显呕吐、脱水、严重腹泻症状。攻毒后连续7天均可以检测到仔猪排毒,而且对攻毒仔猪进行解剖、组织病理学分析,可以观察到小肠肠壁变薄、肠绒毛脱落等典型PDCoV病变,小肠免疫组化分析也可以检测到PDCoV。综上所述,本研究成功在广东地区分离到一株PDCoV 毒株,为研究PDCoV的遗传演化、致病机理奠定了基础;同时为研制PDCoV疫苗提供了重要的科学参考。

Differential Effects of Strategies to Improve the Transduction Efficiency of Lentiviral Vector that Conveys an Anti-HIV Protein, Nullbasic, in Human T Cells

2018, 33(2): 142 doi: 10.1007/s12250-018-0004-7

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Nullbasic is a mutant form of HIV-1 Tat that has strong ability to protect cells from HIV-1 replication by inhibiting three different steps of viral replication: reverse transcription, Rev export of viral mRNA from the nucleus to the cytoplasm and transcription of viral mRNA by RNA polymerase II. We previously showed that Nullbasic inhibits transduction of human cells including T cells by HIV-1-based lentiviral vectors. Here we investigated whether the Nullbasic antagonists huTat2 (a Tat targeting intrabody), HIV-1 Tat or Rev proteins or cellular DDX1 protein could improve transduction by a HIV-1 lentiviral vector conveying Nullbasic-ZsGreen1 to human T cells. We show that overexpression of huTat2, Tat-FLAG and DDX1-HA in virus-like particle (VLP) producer cells significantly improved transduction efficiency of VLPs that convey Nullbasic in Jurkat cells. Specifically, co-expression of Tat-FLAG and DDX1-HA in the VLP producer cell improved transduction efficiency better than if used individually. Transduction efficiencies could be further improved by including a spinoculation step. However, the same optimised protocol and using the same VLPs failed to transduce primary human CD4+ T cells. The results imply that the effects of Nullbasic on VLPs on early HIV-1 replication are robust in human CD4+ T cells. Given this significant block to lentiviral vector transduction by Nullbasic in primary CD4+ T cells, our data indicate that gammaretroviral, but not lentiviral, vectors are suitable for delivering Nullbasic to primary human T cells.
Research Article

PRRSV TJM F92疫苗株对PRRSV NADC30-like分离株有相应的交叉保护作用

张贺伟, 夏铭崎, 王炜, 鞠德财, 曹龙, 吴白, 王鑫, 武莹, 宋妮, 胡嘉欣, 田长啸, 张树成, 武华

2018, 33(2): 153 doi: 10.1007/s12250-018-0027-0

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本实验室于河南某地分离出一株PRRSV毒株,该分离株与NADC30-like毒株有相同的分子特征,将其命名为PRRSV HN201605分离株。本实验目的是研究PRRSV高致病性活疫苗TJM-F92对NADC30-like HN201605毒株有无交叉保护作用。25头PRRSV抗原抗体阴性2月龄猪随机被分为5组,Vac/ChA组,Unvac/ChA组,Vac/ChB组,Unvac/ChB组和对照组。Vac/ChA和Vac/ChB组猪通过肌肉途径免疫TJM-F92(105.0 TCID50/mL),1mL/头。免疫28天(攻毒0天)后,Vac/ChA和Unvac/ChA组猪通过滴鼻途径接种104.5TCID50/mL PRRSV TJ F3毒株,2mL/头;而Vac/ChB和Unvac/ChB组猪采用相同途径和剂量接种NADC30-like HN201605 F3毒株。结果显示,Vac/ChA和Vac/ChB组猪群均得到保护,未见相关临床症状;Unvac/ChA组猪群有明显的高热,病理变化,体重减轻等临床症状,Unvac/ChB组猪群临床症状较轻。结果表明NADC30-like HN201605分离株为中等致病性毒株,高致病性PRRSV疫苗株TJM-F92可以作为一种有效安全的候选疫苗应用于市场。

乙肝核心蛋白与细胞内细丝蛋白B相互作用对HBV复制的影响和机制

李艺琳, 孙艺爽, 孙富运, 华容, 李辰林, 陈朗, 郭德银, 穆敬芳

2018, 33(2): 162 doi: 10.1007/s12250-018-0023-4

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乙肝病毒感染是威胁全球健康的主要问题之一。关于乙肝病毒的研究很多,但乙肝病毒与宿主因子的关系仍不明确,我们需要更多的研究去阐明这些相互作用。细丝蛋白B是一种细胞骨架蛋白,参与细胞发育和多种信号通路。本研究中,我们展示了细丝蛋白B与乙肝核心蛋白相互作用,可以促进病毒复制,增加病毒总RNA和前基因组RNA水平,促进乙肝表面抗原和E抗原分泌。反之,敲低细丝蛋白B可以抑制病毒复制,降低病毒总RNA和前基因组RNA水平,抑制病毒表面抗原和E抗原分泌。另外,我们还发现这种相互作用可能是通过核心蛋白羧基末端的四个精氨酸簇来实现的。综上,我们发现细丝蛋白B作为一种新的宿主因子可以与核心蛋白相互作用来促进乙肝病毒复制。本研究提供了了解乙肝病毒与宿主关系的新视角,为治疗乙肝病毒感染提供了新策略。

小麦矮缩病毒基于单克隆抗体的血清学检测方法

张明皓, 陈蕊, 周雪平, 吴建祥

2018, 33(2): 173 doi: 10.1007/s12250-018-0024-3

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由小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus, WDV)引起的小麦矮缩病目前在中国小麦种植区广泛存在并引起严重的小麦产量损失。为了建立检测WDV可靠、有效的血清学方法,从WDV感染小麦植物中克隆的病毒衣壳蛋白基因(CP)在大肠杆菌中进行蛋白表达,表达的重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,并利用杂交瘤技术获得4株分泌抗WDV单抗的杂交瘤细胞株系(18G10、9G4、23F4 和 22A10)。以制备单抗为核心建立检测小麦植物中WDV的ACP-ELISA和dot-ELISA两种血清学方法。其中,以单抗23F4或22A10为基础建立的ACP-ELISA具有最高的检测灵敏度,其检测感染WDV小麦植物粗提液的灵敏度达到1:163,840倍稀释(w/v, g/ml)。而在建立的4种dot-ELISA中,以单抗23F4为核心建立的dot-ELISA具有最高的检测灵敏度,其检测感染WDV小麦植物粗提液的灵敏度达到1:5,120倍稀释(w/v, g/ml)。128个从中国陕西和青海省小麦种植区采集的田间小麦样品利用建立的两种血清学方法进行WDV检测。调查结果表明大约62%的小麦样品感染了WDV。小麦田间样品的PCR检测及PCR产物的DNA测序和序列比对结果验证了这两种血清学方法检测结果的准确性。因此,我们认为制备的WDV单抗及建立的两种血清学检测方法对控制我国WDV的发生具有重要作用。

猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型双重实时定量PCR方法的建立及应用

李向东, 乔明明, 孙明, 田克恭

2018, 33(2): 181 doi: 10.1007/s12250-018-0025-2

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猪圆环病毒包括圆环病毒1型、圆环病毒2型和最近流行的圆环病毒3型,猪圆环病毒2型是一种重要的病原,而猪圆环病毒3型对猪的致病力尚不清楚。临床上猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型的混合感染较为常见。因此,开发能同时检测上述两种圆环病毒的多重PCR方法在临床诊断中具有重要的意义。本研究针对上述两种圆环病毒Cap基因,设计特异性的引物和探针,研制成功可同时检测上述两种猪圆环病毒的双重实时定量PCR方法,敏感性好、特异性高、重复性好,且与其他病原物交叉反应。该方法检测圆环病毒2型的下限为2.9个拷贝数,检测圆环病毒3型的下限为22.5个拷贝数。该方法用于检测2017年上半年采集的340份临床样品,猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型混合感染的阳性率高达27.6%。该方法为临床中同时检测上述两种猪圆环病毒提供了有效的检测工具。

用甘蓝夜蛾核多角体病毒PIF1,2,3替换棉铃虫核多角体病毒的同源物: 感染力和复合物稳定性

汪习, 张环宇, 张楠, 陈诚, 李江, 邓菲, 王华林, 王曼丽, 胡志红,

2018, 33(2): 187 doi: 10.1007/s12250-018-0014-5

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杆状病毒起始有效的口服感染依赖于一类名为口服感染因子的蛋白与中肠上皮细胞的相互作用。我们构建了用甘蓝夜蛾核多角体病毒PIF1,2,3替换棉铃虫核多角体病毒同源物的一系列假型病毒,并测定了它们在细胞水平和虫体水平的感染力。转染-感染实验显示,所有的重组病毒均可以在细胞系和虫体中产生感染性的出芽型病毒粒子(BV)。电镜观察发现,重组病毒的多角体(OB)和包埋型病毒粒子(ODV) 在结构上与野生型病毒类似。然而生测实验显示,在这些假型病毒中,除了pif3替换的病毒仍保留较低的感染力之外,其余病毒完全丧失了对棉铃虫幼虫的口服感染力。与生测结果一致的是,PIF复合物只在pif3替换的假型病毒的ODV中检测到。这些结果说明,PIF复合物对于杆状病毒的口服感染是必需的,并且在PIF复合物形成的过程中,PIF1和PIF2的病毒特异性较强,而PIF3的兼容性似乎更强,在一定情况下可以在异源的环境下发挥功能。
Letter

First Serological Evidence on Endemicity of HEV Infection in Wild Boar (Sus scrofa) Populations from Portugal

2018, 33(2): 197 doi: 10.1007/s12250-018-0008-3

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Hunting is a common and popular pastime in Portugal. Hunted animals are, generally, for human consumption as meat or local products that are consumed without cooking, increasing the risk of zoonotic transmission of several infectious agents. The present study intended to characterize HEV infection in hunted wild boars (species Sus scrofa) from two regions of Portugal in order to estimate its importance as reservoir for zoonotic spread of HEV to humans, and its possible implication in public health. Markers for both past and/or ongoing HEV infection were evaluated in serum, bile and stool samples of 29 wild boars. The presence of specific HEV antibodies as marker of past infection was evaluated in serum samples, while active HEV infection was evaluated through the detection of HEV genome in bile and stool samples. HEV specific antibodies were detected in 14% of the studied animals, while none of the tested bile or stool samples revealed detectable HEV genome. Despite no active HEV infection was demonstrated in the hunted animals included in the present study, serological analysis revealed the endemicity of HEV infection in Portuguese wild boars from the studied regions, corroborating its possible role as zoonotic reservoir of such virus. The proved endemicity of HEV infection among wild boars further support the importance of including HEV in national and regional surveillance programs for wild animal diseases, as well as to the awareness for thorough cook all wild boar products and to the education of occupationally exposed people in order to prevent HEV infection.

灭活SARS-CoV疫苗免疫的恒河猴中抗体依赖增强SARS-CoV感染的评估

罗凡, 廖凡路, 王辉, 汤宏斌, 杨占秋, 侯炜

2018, 33(2): 201 doi: 10.1007/s12250-018-0009-2

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众所周知,疫苗诱导的抗体可以通过抗体依赖的感染增强作用(ADE)来加重感染。疫苗导致的 SARS-CoV抗体依赖的感染增强作用也曾有报道。我们曾研究发现SARS-CoV Z-1株灭活疫苗能在恒河猴中产生良好的中和保护性抗体,但尚未对其是否产生ADE作用进行评价。为了确认SARS-CoV Z-1疫苗在临床应用上的安全性,本研究对该疫苗的抗体依赖的感染增强作用进行了评价。本研究首先采用SARS-CoV Z-1株灭活疫苗或PBS液臂三角肌肌注免疫接种恒河猴,当动物体内抗体处于低滴度(1:10)时,给予气管内接种SARS-CoV NS-1株,同时设立正常阴性对照组。观察各组恒河猴体温,精神状态、呼吸、饮食、粪便及是否咳嗽等临床表现;在病毒接种后第2、5、7、9、11天收集恒河猴血液、鼻拭,应用RT-PCR法和病毒分离检测样本中病毒感染情况,进行病毒载量分析;于病毒接种后第10天或第14天分别处死部分恒河猴,收集肺组织、部分肺组织固定和HE染色,进行组织病理学检查,部分肺组织匀浆用于病毒学检测。结果显示,在感染病毒后,相比较无抗体存在的恒河猴组,体内有低滴度抗体存在的恒河猴组其一般临床症状未见加重;病毒载量分析,未见病毒复制增加;病理组织学检查也未见组织病理变化加重的现象。本研究证明,在恒河猴体内SARS-CoV Z-1株灭活疫苗不引起抗体依赖的感染增强效应,这为临床安全使用该疫苗奠定了理论基础。

核小体装配蛋白1样1调节丙肝病毒复制及与病毒蛋白非结构蛋白3作用

殷佩齐, 李叶, 周丽娅, 张磊亮

2018, 33(2): 205 doi: 10.1007/s12250-018-0006-5

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核小体装配蛋白1样1(NAP1L1)参与许多DNA病毒和逆转录病毒的生命周期,但NAP1L1是否参与正链RNA丙肝病毒HCV尚不清楚。我们的研究发现NAP1L1可以与非结构蛋白3相互作用。我们还发现,敲降NAP1L1能够降低HCV的受体B族I型清道夫受体(SR-B1)的表达从而限制了病毒进入。我们的研究对研究NAP1L1在丙肝病毒生命周期中的作用提供了机制性的启发,将NAP1L1对病毒的作用扩展到了RNA病毒。

中国苏州2009-2014年HIV-1分子流行病学调查

袁莹, 唐圣洁, 李愿, 阎冬梅, 彭新群, 雅雪蓉, 宋艳辉

2018, 33(2): 209 doi: 10.1007/s12250-018-0022-5

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苏州正经历着HIV/AIDS的动态流行,虽然苏州HIV-1流行的血清学调查已有报道,但是对于苏州地区HIV-1分子流行病学调查还缺乏详细资料。在本研究中,我们对苏州地区2009-2014年261例HIV-1阳性样本进行了详细的序列分析。我们的数据表明,HIV-1 CRF01_AE是主要的HIV-1流行株,占总样本量的52.1%。接下来是CRF07_BC, CRF08_BC和 B亚型,分别占30.3%,8.4%和8.0%。其中B亚型的基因距离和变异度较高。有趣的是,我们在男性同性恋患者CRF01_AE样本构建的基因进化树中发现了一个8人的簇。虽然HIV-1在苏州主要通过性途径传播,在研究中我们也发现了母婴之间的垂直传播。本研究揭示了目前苏州HIV-1流行的主要情况,为今后制定合理有效的预防措施提供了策略。