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2018年33卷3期

The newly emerged mosquito-borne Zika virus (ZIKV) has posed a global threat to human health. Several ZIKV vaccine candidates have been developed, and demonstrated to be efficacious in preclinical studies in mice and nonhuman primates. In this issue, Shiyu Dai et al. report a new virus-like particle (VLP) ZIKV vaccine based on the baculovirus expression system. Those VLPs demonstrate good immunogenicity in immunized mice, as they stimulate high levels of virus neutralizing antibody titers, ZIKV-specific IgG titers and potent memory T cell responses. The cover is adopted from an electron micrograph of negative staining baculovirus-expressed ZIKV VLPs (kindly provided by Fei Deng) with artistic processing. See page 213–226 for details.

Research Article

杆状病毒表达寨卡病毒样颗粒诱导小鼠产生中和抗体

戴诗雨, 张涛, 张艳芳, 王华林, 邓菲

2018, 33(3): 213 doi: 10.1007/s12250-018-0030-5

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寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)是黄病毒科黄病毒属的蚊传虫媒病毒,其感染与新生儿小头症密切相关,且能引起许多神经系统疾病,如格林巴利综合症。ZIKV对人类健康带来严重威胁,目前还没有成熟的针对ZIKV特异性的疫苗和治疗药物。病毒样颗粒(Virus-Like Particles,VLPs)是由病毒蛋白自组装形成的与天然病毒形态、抗原性相似的颗粒,不含病毒的遗传物质,不可复制也无感染性。VLP良好的免疫原性,快速、经济、安全的生产工艺使其在应对烈性、突发病毒性疾病的疫苗研制中受到广泛关注。我们以杆状病毒-昆虫细胞表达系统,构建了表达ZIKV糖蛋白prME的重组病毒。结果表明,重组杆状病毒在昆虫Sf9细胞中表达的ZIKV prM蛋白和E蛋白可以组装形成与天然ZIKV病毒粒子形态相似的VLP。纯化该VLP免疫小鼠,可以诱导小鼠产生中和抗体,及特异的体液免疫和细胞免疫应答,显示良好的免疫原性。该研究结果为以ZIKV VLP为基础的基因工程疫苗的开发奠定了基础。

HIV/AIDS患者唾液中EB病毒的评价及HAART治疗的作用:一项回顾性研究

阎岩, 任勇, 陈仁芳, 胡静, 纪永佳, 杨君洋, 沈佳胤, 胡绿荫, 裴豪, 王俊, 邱源旺, 卢洪洲, 黄利华

2018, 33(3): 227 doi: 10.1007/s12250-018-0028-z

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目前中国对HIV/AIDS患者唾液中EB病毒感染情况及HAART治疗作用的报道较少。我们针对2016-2017年间于无锡和上海传染病医院就诊的HIV/AIDS患者,进行了一项EB病毒感染情况的回顾性研究。我们采用ELISA法和荧光定量PCR法分别检测了EB病毒阳性标本中EB病毒特异性抗体及唾液病毒DNA含量,接着用流式细胞仪术检测了HIV/AIDS患者的CD4计数。最终选择了372例HIV/AIDS患者进行回顾性分析。结果表明,HIV/AIDS HAART(H)治疗组及非治疗组(NH)的EB-IgG和IgM均比HIV阴性人群高,其中未治疗组血清抗体阳性率最高(IgG, 94.27%; IgM, 68.98%),同时EB病毒再活化率最高。治疗组(73.6%)及未治疗组(100%)唾液中EB病毒DNA阳性率及DNA量均高于HIV阴性人群(35.79%,> 2倍)。HIV/AIDS治疗组中EB病毒阴性人群的CD4数量较高。以上结果表明,HAART治疗有助于减少EB病毒在唾液中的含量,也有助于降低EBV在HIV/AIDS患者间传播的风险。

载体细胞向肿瘤有效递送溶瘤麻疹病毒的决定因素研究

许纯, 夏茂, 孟刚, 李春妍, 蒋爱芹, 魏继武

2018, 33(3): 234 doi: 10.1007/s12250-018-0033-2

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溶瘤麻疹病毒(oncolytic measles virus,OMV)能够有效治疗肿瘤。在临床使用OMV治疗的过程中,患者体内存在的抗麻疹病毒中和抗体(neutralizing antibodies, NAbs),能够特异性结合病毒血细胞凝集素蛋白(hemagglutinin, H蛋白),从而大大阻碍溶瘤效果。为了克服这个障碍,细胞被人们用作装载并递送OMV的载体。理论上,不同的装载策略会影响治疗效果,但目前尚未见针对如何优化体外装载达到最佳疗效的研究。本研究系统评估了不同体外装载策略对麻疹病毒溶瘤效果的影响。结果发现,无NAbs时,延长装载时间可以大大提高载体细胞介导的溶瘤作用;然而在存在中和抗体的条件下,延长装载时间并不能提高甚至会降低载体细胞介导的溶瘤作用。我们进一步发现,载体细胞表面H蛋白的表达量,取决于装载时间而非装载剂量。最后,我们证实,NAbs通过封闭H蛋白阻止载体细胞将病毒递送到肿瘤细胞中;并且,该阻断过程发生在载体细胞与肿瘤细胞建立相互接触之前。在细胞载体介导的病毒溶瘤治疗领域,我们的结果为如何进行有效装载提供了丰富的信息,对OMV治疗肿瘤的临床应用具有指导性价值。

力竭运动不影响狂犬疫苗在小鼠体内诱导的体液免疫水平及保护效果

夏伦, 李敏锐, 张亚静, 阮俊程, 裴捷, 史佳乐, 傅振芳, 赵凌, 周明, 田大勇

2018, 33(3): 241 doi: 10.1007/s12250-018-0026-1

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狂犬病是一种古老且至今仍对公共卫生安全造成严重威胁的流行病,其致死率几乎100%。目前,疫苗免疫仍然是人和动物预防狂犬病最为有效的手段。本文基于小鼠的一次性力竭模型,重点研究力竭运动与狂犬病灭活疫苗免疫后诱导的体液免疫反应之间的关系。我们发现,对于狂犬疫苗免疫后的小鼠,无论是否进行力竭运动,其在体重变化、中和抗体滴度、抗体亚型和攻毒保护率等指标都没有显著差异。这说明,力竭运动并不会影响狂犬病灭活疫苗的免疫效果。

猪FcεRI受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒的增殖及炎症反应

时培殿, 张丽琳, 王家顺, 芦冬, 李艺, 沈梦露, 任婕, 张蕾, 黄金海

2018, 33(3): 249 doi: 10.1007/s12250-018-0032-3

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猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)可通过抗体依赖增强作用(ADE)感染,并引起与I型过敏反应类似的临床症状。但猪的Fc受体在其中的作用不详。本研究应用猪肺泡巨噬细胞感染模型,检测了在有无PRRSV抗体参与下PRRSV感染后的猪Fc受体的表达情况。实验结果表明,在PRRSV-抗体复合物感染条件下,FcγIIFcεRI基因显著上调。在PRRSV特异性抗体存在的情况下:(1)PRRSV感染其允许细胞3D4/21及FcεRI转染的非允许细胞293T时,病毒滴度均明显提高;(2)转录组数据表明,抗炎因子AKT、ERK的转录也显著增强;炎性调节分子PLA2G6、LOX、TRPM8、TRPM4的转录水平在PRRSV-抗体接种细胞比单纯的PRRSV处理组显著下调。
我们的结果表明,FcεRI与PRRSV 抗体介导的病毒增强效应有关,并参与介导了抗原提呈、PRRSV感染引发的炎症反应。这为认识FcεRI介导PRRSV的ADE效应、PRRSV感染引起的特殊性炎症症状提供了新视角。

HIV-1 Tat1-72通过活化PP1及CREB-BDNF信号通路损伤神经原树突

刘瑜, 周得玉, 冯佳斌, 刘洲, 胡月, 刘畅, 孔晓红

2018, 33(3): 261 doi: 10.1007/s12250-018-0031-4

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近年来,联合抗病毒治疗已可有效控制HIV感染者AIDS进程,但HIV相关的神经认知障碍极大程度影响HIV感染者的生活质量。HIV并不直接感染神经元,而病毒蛋白如Tat可造成树突损伤引起神经元损伤,但详细的分子机制仍不清楚。本文首先证实了Tat1-72可引起原代胎鼠神经元损伤,其次Tat1-72能引起原代胎鼠神经元树突长度变短、数目减少。加入Tat1-72后0到6 小时,可以影响细胞PP1的表达,并通过降低其Thr320磷酸化水平增强PP1活性;Tat1-72处理原代神经元细胞24小时后,降低CREB的活性并下调CREB下游靶基因的mRNA水平(BDNF, c-fos, Egr-1)。本研究表明Tat1-72可能通过调控PP1的活性和CREB/BDNF信号通路引起神经元损伤。

基于微滴式数字PCR和RT-qPCR建立高灵敏度和准确性的寨卡病毒核酸检测方法

惠媛, 吴志明, 覃直然, 朱利, 梁均和, 李旭娟, 符含敏, 冯世禹, 余健海, 何晓恩, 陆维智, 肖维威, 吴清华, 张宝, 赵卫

2018, 33(3): 270 doi: 10.1007/s12250-018-0037-y

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建立寨卡病毒高灵敏度检测方法有助于实现疾病控制过程的早期检测,减少严重神经并发症的发生。本研究建立了基于NS5基因的寨卡病毒核酸检测微滴式数字PCR(micro-droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)和RT-qPCR(real-time quantitative PCR)方法。利用寨卡病毒质粒标准品进行测试,RT-qPCR结果表明,Ct值在101到108copy/μL范围内线性关系较好,R2为0.999,扩增效率为92.203%。而当浓度低至101copy/μL以下时,RT-qPCR方法无法检测。而ddPCR在100到104copy/μL范围内线性关系良好,可以检测浓度低至1copy/μL的样品。对于寨卡病毒临床样品,RT-qPCR适用于较高浓度样品(101copy/μL以上),ddPCR可以准确灵敏的检测极低浓度样品(101copy/μL以下)。因此ddPCR方法可以应用于寨卡病毒早期诊断、实验室研究和监测工作中。
Letter

EV71感染致死病例肺组织病理学特征及病毒抗原分布

梁珍丽, 潘洪波, 王熹婧, 朱银川, 党裔武, 樊晓晖, 高灵茜, 张增峰

2018, 33(3): 278 doi: 10.1007/s12250-018-0029-y

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EV71感染可引发儿童手足口病,严重者伴有中枢神经系统疾病、心肺衰竭,甚至死亡,成为重要的中枢神经毒性病原体之一。为探索EV71引起肺损伤的原因,我们首先检测人肺组织EV71受体SCARB2和PSGL-1分布,发现SCARB2在肺内支气管、细支气管上皮细胞、肺泡细胞及巨噬细胞呈阳性分布,PSGL-1在肺内支气管、细支气管上皮细胞及巨噬细胞呈少量阳性分布,肺泡细胞阴性。EV71感染死亡患儿肺组织显示肺内支气管和细支气管炎,管壁周围T细胞、B细胞等炎症细胞弥漫或灶性浸润,肺泡间隔增宽,间隔内毛细血管高度扩张充血、淤血,炎症细胞浸润,肺泡腔内可见不同程度的蛋白水肿液,内有纤维素渗出,部分肺泡腔可见明显透明膜形成。检测肺组织EV71抗原分布,肺内支气管和细支气管上皮细胞病毒抗原阳性,肺泡细胞和巨噬细胞少量阳性。因此, EV7l感染重症患者,除伴有中枢神经系统损伤外,其肺组织也是病毒攻击的主要靶器官,此类重症患儿因神经源性和/或病毒直接感染引起肺损伤,其损伤以肺水肿及间质性肺炎病变为主。

中国福建省成人病例中发现欧亚禽源H1N1猪流感病毒

谢剑锋, 张炎华, 赵琳, 修文琼, 陈宏彬, 林琦, 翁育伟, 郑奎城

2018, 33(3): 282 doi: 10.1007/s12250-018-0034-1

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自1979年以来,欧亚禽源H1N1猪流感病毒(EAS-H1N1)已在猪中传播,并且在一些国家报道了人感染EAS-H1N1病毒的散发病例。 2016年10月,中国福建省在住院的成人重症肺炎患者中发现了欧亚禽源H1N1猪流感病毒。采用鸡胚分离病毒并提取病毒RNA,通过RT-PCR和测序获得了病毒全基因组序列。系统进化分析显示,该病毒是一种新型三源重组H1N1病毒,其中含有来自欧亚禽源猪流感的HA和NA节段,甲型H1N1流感的PB2、PB1、PA、NP和M节段,以及经典猪流感的NS节段,被称为A/Fujian-cangshan/SWL624/2016(FJ / 624/16)流感病毒。FJ / 624/16病毒全基因序列与A / Hunan / 42443/2015和A/swine/Guangdong/1/2010病毒全基因序列的相似性分别为94.3%-98.2%和91.2%-95.4%。在这项研究中,分离株在HA蛋白中含有E190D和D225E氨基酸位点变异,表明病毒优先选择α-2,6-连接的唾液酸而增加在人类上呼吸道中的结合能力。该病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,对金刚烷胺类药物耐药。FJ/624/16病毒的一些氨基酸残基可能增加病毒的毒力或对哺乳动物的适应性。为了及时发现病毒的毒力和人传人能力,作为整个流感大流行防备计划的一部分,应进一步加强对猪和人的流行病学和病原学监测。

水生呼肠孤病毒VP5豆蔻酰基化N端的功能分析

陈清秀, 郭洪, 张付贤, 方勤

2018, 33(3): 287 doi: 10.1007/s12250-018-0036-z

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无囊膜病毒必须穿透细胞膜才能起始有效的病毒侵染。与囊膜病毒相比较,目前对无囊膜病毒进入细胞机制知之甚少。本研究采用荧光标记的豆蔻酰基化的水生呼肠孤病毒VP5N端短肽直接观察到其穿透细胞膜的过程。结果表明,豆蔻酰基化VP5短肽能够很快穿透细胞膜,这种穿透作用无细胞特异性。此外,通过采用野生型与体外重组的病毒及突变型病毒颗粒感染性分析比较试验,发现豆蔻酰基化VP5短肽具有促进病毒感染性的作用。其研究结果为进一步揭示VP5在病毒感染中与细胞的相互作用机制奠定了坚实的基础。
PERSPECTIVE

外籍人员:云南省实现AIDS防控90-90-90目标的新挑战

陈鑫, 朵林, 叶梅, 张驰宇, 郑永唐

2018, 33(3): 291 doi: 10.1007/s12250-018-0038-x

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云南省是中国受HIV/AIDS冲击最严重的地区之一。在过去的十年,云南省在HIV/AIDS防控上取得了重大的成就。然而,云南省居住着数量庞大的外籍人员,该人群可能成为云南省实现2020年AIDS防控90-90-90目标和2030年根除AIDS目标的重要挑战。在此,我们分析了该人群的HIV/AIDS防控现状以及可能存在的问题,同时讨论了与该人群相关的HIV传播的防控策略。
Correction

Correction to: Molecular detection of viruses in Kenyan bats and discovery of novel astroviruses, caliciviruses and rotaviruses

2018, 33(3): 294 doi: 10.1007/s12250-018-0035-0

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